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背景与目的:阿尔茨海默病(AD)是一种常见的发生于老年及老年前期的神经系统退行性疾病,以进行性认知功能障碍、记忆损害、个性改变以及精神行为异常为主要表现,WHO已将AD列为21世纪五大重点疾病之一。目前,用于治疗AD的药物只能在一定程度上改善AD的临床症状,而有效防止AD发生或者治愈AD的药物尚未出现。我们前期的研究发现,生姜提取物对p淀粉样蛋白(Aβ)诱导的AD模型鼠的行为功能障碍具有保护作用。而6-姜酚是从生姜中提取的酚类物质,是生姜提取物中的重要活性成分。本实验通过体外孵育的方法观察6-姜酚对Aβ-42聚集的影响,探讨6-姜酚对Aβ1-42所致的大鼠PC12细胞损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:(1)Aβ1-42单独或与不同浓度的6-姜酚于37℃培养箱中共同孵育5d后,采用硫磺素T(ThT)荧光检测法分析6-姜酚对Aβ1-42聚集的影响;(2)未分化的PC12细胞经神经生长因子(NGF)作用5d分化为类神经元样细胞后,通过MTT实验检测不同浓度Aβ1-42对PC12细胞作用24、48及72 h后的细胞存活率及观察不同浓度6-姜酚对Ap1-42诱导细胞凋亡的保护作用;(3)通过Hoechst 33258核染色法检测6-姜酚对Aβ1-42致PC12细胞凋亡的细胞核形态改变;(4)采用流式细胞凋亡术进一步分析6-姜酚对Ap1-42致PC12细胞凋亡的保护作用;(5)采用DCFH-DA荧光探针法检测6-姜酚对Aβ1-42诱导PC12细胞产生氧自由基(ROS)的影响;(6)根据测定试剂盒检测6-姜酚对Aβ1-42诱导PC12细胞产生乳酸脱氢酶(LDH)、抗氧化物歧化酶(SOD)、细胞内丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的影响;(7)采用Western Blot检测6-姜酚对Aβ1-42诱导的PC12细胞糖原合成激酶3β (GSK-3β)、磷酸化GSK-3β (Ser9), Akt及磷酸化Akt (Ser473)表达的影响。结果:(1)6-姜酚与Ap1-42共同孵育5 d后的荧光强度均较Aβ1-42组显著降低,提示6-姜酚对Aβ1-42的聚集具有拮抗作用;(2)Aβ1-42作用于PC12细胞,细胞存活率与Aβ1-42的剂量及作用时间呈负相关,其中10 μM的Aβ1-42作用48 h对PC12细胞产生较为显著的损伤作用,因而我们以此作为AD的细胞模型,用于后续的实验研究;(3)MTT实验结果显示,6-姜酚在80、120及200μM时均对Aβ1-42引起的细胞损伤具有显著的保护作用,并且在剂量为120μM时具有最佳的作用效果;(4)Hoechst 33258核染色及流式细胞凋亡术实验均提示6-姜酚在80、120及200μM时对Aβ1-42引起的细胞损伤具有显著的保护作用;(5)Aβ1-42显著增加细胞内ROS与MDA的含量及培养液中LDH的活性及NO的水平,而经6-姜酚预处理4h后ROS、MDA与NO的含量及LDH的活性均较Aβ1-42处理组显著降低;此外,6姜酚处理组的SOD水平显著高于Aβ1-42处理组的;(6)PC12细胞经Aβ1-42作用48 h后,GSK-3β及Akt的磷酸化水平均较正常组显著降低,而80及120μM6-姜酚处理组中GSK-3β及Akt的磷酸化水平则均显著高于Aβ1-42处理组的。结论:(1)6-姜酚可拮抗Aβ1-42的聚集,因而可能具有神经保护作用;(2)6-姜酚对Ap1-42致PC12细胞损伤具有保护作用,可能与其抗氧化损伤、抗炎症作用,以及激活Akt的活性、抑制GSK-3β的活性有关。因此,6-姜酚对AD具有潜在的防治作用,其确切的作用机制有待进一步研究。