尖叶假龙胆对非酒精性脂肪肝细胞模型保护作用及机制研究

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非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver diseasa, NAFLD)是由非酒精因素引起的肝脏中脂肪代谢失衡,而诱发的一系列机理复杂的以多方面病理性改变为表型的肝脏代谢性疾病。近年来,随着我国居民饮食结构、生活习惯的改变,NAFLD的发病率逐年上升。临床上还未有针对NAFLD的专用治疗药物,NAFLD的病情恶化发展,将会带来极大的社会医疗负担。因此寻求有效治疗手段和针对该疾病的药物研发具有重要的意义。
  尖叶假龙胆(Gentianella acuta , Michx. Hulten)是一味蒙药材,属于龙胆科(Gentiananceae)假龙胆属(Gentianella Moench.),以前是蒙古地区的民间用药,用于治疗腹泻、黄疸性肝炎、心律失常等疾病,中药材的使用是实践中积累的医学宝藏,NAFLD作为一种慢性逐步发展的疾病,相较于西药治疗方式,中药材以其独一无二的优点:毒副作用少,标本兼治等特点,更适于NAFLD的辅助治疗及维持性治疗,但目前对于中药治疗NAFLD的机制研究相对较少,更多则停留于经验传承和实际治疗效果。基于这一现状,本研究以天然蒙药材尖叶假龙胆为研究对象,分别利用水回流提取法和乙醇回流提取法对该药物中有效成分进行提取,作用于由游离脂肪酸(Free fatty acid, FFA)(油酸钠:棕榈酸钠=1:2)诱导人肝癌细胞(HepG2)构造的非酒精性脂肪肝细胞模型,观察两种尖叶假龙胆提取物对NAFLD的作用;并凭借试剂盒检测、蛋白质免疫印迹等手段比较两种提取物对NAFLD的作用差异;最后采用蛋白免疫印迹(Western Blot)测定SREBP-1、ACC1、FAS蛋白表达水平,初步探究尖叶假龙胆提取物改善NAFLD可能的作用机制。
  由试验结果可知NAFLD细胞模型建立的最佳条件是FAA浓度为250μM,时间为48 h。尖叶假龙胆提取物可以极显著降低NAFLD细胞模型的TG,TC水平(P<0.001),从剂量发挥药效的角度以及对NAFLD组TG、TC水平的影响效果综合评价,试验证明尖叶假龙胆乙醇提取物比水提取物对于NAFLD的作用效果更好且更高效。尖叶假龙胆提取物治疗NAFLD的作用机制可能是通过下调SREBP-1蛋白水平并且降低下游靶位点脂质合成酶ACC1蛋白的表达,从而抑制肝细胞脂质的合成,减少肝脏中的脂质积累加剧,抑制NAFLD的发展进程,对NAFLD起到治疗的作用。本研究不仅探索建立了NAFLD细胞模型和初步提出并佐证了天然蒙药材尖叶假龙胆对于NAFLD改善途径的机制,同时从分子层面初步证实了传统蒙药材尖叶假龙胆作为药物改善和治疗NAFLD的可靠性和有效性。为科学化利用尖叶假龙胆这一传统中医药资源,开发疗效更高针对性更强的中药制剂提供了一定的理论依据。
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