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第一部分反义抑制miR-221和miR-222对前列腺癌细胞相关生物学功能的影响 目的： 检测抑制miR-221和miR-222对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响。 方法： (1)分别转染miR-221 inhibitor质粒和miR-222 inhibitor质粒，通过G418筛选构建PC-3细胞miR-221低表达细胞株和miR-222低表达细胞株。通过Realtime PCR对构建的miR-221低表达细胞株和miR-222低表达细胞株进行验证。 (2)应用CCK-8方法检测miR-221 inhibitor和miR-222 inhibitor对前列腺癌细胞增殖的影响。 (3)应用流式细胞术检测miR-221 inhibitor和miR-222 inhibitor对细胞凋亡的影响。 (4)细胞划痕修复实验以及transwell小室检测miR-221 inhibitor和miR-222inhibitor对细胞迁移能力的影响。 结果： (1) Real time PCR显示，转染miR-221 inhibitor质粒和miR-222 inhibitor质粒后，细胞中miR-221或者miR-222表达下调。 (2)成功抑制miR-221和miR-222表达后，与空载pEX-5组比较，细胞的增殖能力(OD值/450nm)明显下调。 (3)成功抑制m iR-221和miR-222表达后，各组(pEX-5，miR-221 inhibitor，miR-222 inhibitor)相对于对照组的凋亡率分别是（1.03±0.02），(2.84±0.65)，（2.63±0.44），miR-221和miR-222低表达组的相对凋亡率相对于pEX-5对照组，显著升高并且差别有统计学意义(P＜0.05)。 (4)转染pEX-5，miR-221 inhibitor，miR-222 inhibitor后，利用划痕修复实验观察各组的闭合速率，结果显示，与对照组pEX-5比较，miR-221 inhibitor组与miR-222 inhibitor组的迁移速率在48小时和72小时明显降低。结果见图表。Transwell迁移实验的结果与划痕修复实验的结果一致。 结论： 抑制细胞中miR-221和miR-222表达后，可以抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖和迁移，促进细胞凋亡。 第二部分 SIRT1对前列腺癌细胞生物学功能的影响 目的： 观察SIRT1对前列腺癌细胞生物学作用的影响。 方法： (1)转染SIRT1抑制质粒后，通过G418筛选构建SIRT1低表达细胞株。 (2)应用CCK-8方法检测SIRT1对前列腺癌细胞增殖的影响。 (3)流式细胞术检测SIRT1对凋亡的影响。 (4)transwell小室检测SIRT1对细胞迁移本领的影响。 结果： (1)成功构建SIRT1低表达细胞株。 (2)成功抑制PC-3细胞中SIRT1表达后，细胞增殖活性与对照组之间没有明显的统计学差异(P＞0.05)。 (3)成功抑制SIRT1表达后，pGPU6组与pGPU6-siSIRT1组相对于pGPU6的凋亡率分别是（1.06±0.04）和（0.62±0.06），差异有统计学意义(P＜0.01)。 (4)成功抑制SIRT1表达后，利用transwell迁移实验检测pGPU6组和siSIRT组穿过小室膜的相对细胞数分别是（1.02±0.02）和（2.33±0.20），两组穿过细胞数的相对量之间的差别具有统计学意义(P＜0.05)。 结论： 抑制细胞中SIRT1的表达后，虽然对PC-3细胞的增殖没有产生明显的影响，但抑制了细胞的凋亡并且促进了细胞迁移。 第三部分 miR-221和miR-222对SIRT1的调节作用 目的： 验证反义抑制miR-221和miR-222是否通过调节SIRT1的表达而影响前列腺癌细胞生物学功能。 方法： (1)抑制细胞中miR-221和miR-222后，免疫印记方法和荧光定量PCR检测SIRT1在蛋白水平和mRNA水平的变化。 (2)双萤光素酶报告基因实验检测miR-221和miR-222是否与SIRT1存在靶向结合关系。 结果： (1)分别抑制miR-221和miR-222后，各组SIRT1在蛋白水平的相对表达量分别是（1.00±0.01）、（2.0±0.17）、（1.7±0.05），抑制miR-221和miR-221后，SIRT1蛋白表达增高(P＜0.05，P＜0.01 v.s.pEX-5);但在mRNA水平的表达分别是（0.99±0.05）、（1.2±0.1）、（1.1±0.05），各组之间不存在统计学差异(P＞0.05)。 (2)双萤光素酶报告基因实验显示，抑制miR-221和miR-222组的萤光素酶活性与对照组萤光素酶活性没有统计学差异。 结论： miR-221和miR-222可以抑制SIRT1的表达，但是，SIRT1并不是miR-221和miR-222的直接靶向基因。