【摘 要】
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目的:本研究旨在通过网络药理学联合GEO数据库分析,及运用聚合酶链式反应（Polymerase,PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）等实验技术探讨壮医验方胃毒清对实验性胃癌的抗肿瘤作用及机制,为壮医验方胃毒清的临床推广和应用提供客观科学依据。方法:1.检索TCMSP、TCMID等药物数据库及相关文献明确“壮医验方胃毒清”药物成分,根据药代动力学性质筛选活性成分并预测分子靶点,
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目的:本研究旨在通过网络药理学联合GEO数据库分析,及运用聚合酶链式反应（Polymerase,PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）等实验技术探讨壮医验方胃毒清对实验性胃癌的抗肿瘤作用及机制,为壮医验方胃毒清的临床推广和应用提供客观科学依据。方法:1.检索TCMSP、TCMID等药物数据库及相关文献明确“壮医验方胃毒清”药物成分,根据药代动力学性质筛选活性成分并预测分子靶点,并在GEO数据库中检索有关胃癌疾病的基因芯片进行差异基因分析。将药物与疾病相交的靶点,绘制成维恩图,并生成药物疾病靶点网络图。从在线STRING数据库中获取交叉基因以获得PPI核心蛋白相互作用网络。同时使用Cytoscape3.7.2软件进行拓扑分析,使用R软件进行GO和KEGG富集分析。2.将60只雄性裸鼠随机分为5组:模型组、顺铂阳性对照组（顺铂组）、胃毒清高、中、低剂量组,每组12只。皮下注射胃癌SGC-7901细胞混悬液,建立裸鼠移植性胃癌模型。胃毒清连续灌胃给药21天,顺铂腹腔注射给药3次（一周1次）,取瘤称重,计算抑瘤率;以PCR、WB法检测裸鼠瘤体内组织的PTGS2、IL6、ICAM1 mRNA和蛋白表达情况。结果:1.网络药理学分析结果显示,在胃毒清中共检索到194个活性成分,“壮医验方胃毒清-胃癌-靶点”的核心作用靶点共35个,包括IL-6、ICAM1、CCL2、PTGS2、PRKCB、MMP9、CXCL2、VCAM1等。胃毒清治疗胃癌的相关KEGG富集显示,核心基因涉及TNF信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化、脂质与粥样动脉硬化、癌症内的小分子核糖核酸、IL-17信号通路等免疫、血管生成等肿瘤相关通路。壮医验方胃毒清抗胃癌涉及的主要生物过程有对脂多糖的反应、对细菌来源分子的反应、循环系统中的血管过程、氧化水平反应、细胞对药物的反应、营养反应、氧化应激反应等。2.在抑瘤率方面,与模型组比较,顺铂组、胃毒清高、中、低剂量组中瘤体积抑瘤率、质量抑瘤率均有不同程度的减轻（P＜0.05）,与模型组肿瘤生长相比,胃毒清高、中、低剂量组和顺铂组的裸鼠肿瘤生长相对缓慢,肿瘤生长抑制相对明显的是胃毒清中剂量组与顺铂组（P＜0.05）。在蛋白表达方面,WB结果显示,胃毒清能够降低胃癌裸鼠肿瘤组织中PTGS2、IL6、ICAM1的蛋白表达的水平（P＜0.05）。在基因相对表达量方面,PCR结果显示,胃毒清同样能够降低胃癌裸鼠肿瘤组织中PTGS2、IL6、ICAM1的m RNA相对表达量（P＜0.05）。结论:1.通过网络药理学联合GEO差异基因对胃毒清治疗胃癌进行作用机制分析显示:该方通过多靶点、多通路作用于胃癌,主要通过抗炎、抑制氧化应激、促细胞凋亡、抗肿瘤增殖等作用机制治疗胃癌。2.本实验研究表明,壮医验方胃毒清对移植性胃癌裸鼠有抑瘤效果,可显著抑制肿瘤增长,并且可降低PTGS2、IL6、ICAM1 m RNA及蛋白表达水平,作用机制可能与调控TNF信号通路有关。
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