新疆地区致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及部分特性研究

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产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种可引起人畜腹泻的致病性细菌,尤其对初生犊牛、羔羊、仔猪等幼畜具有较大危害。2015年3~6月,新疆石河子、沙湾、阿克苏、博乐四个地区的6个规模化牛场先后发生初生犊牛腹泻,发病率达40%~60%,死亡率达50%~70%,导致犊牛死亡千余头,造成了严重的经济损失,为查明这些牛场犊牛腹泻是否与大肠杆菌有关,在流行病学、临床检查以及剖解的基础上,无菌采取6个规模化牛场因腹泻死亡犊牛的肠系膜淋巴结等病料分别进行了细菌的分离鉴定、血清型鉴定、肠毒素基因及菌毛基因的PCR检测、溶血性测定、小鼠致病性试验、药物敏感性测定。研究结果如下:(1)采集了新疆南北疆4个地区的6个规模化牛场因腹泻死亡犊牛的肠系膜淋巴结、肝脏及肠内容物等病料60份,分离获得53株培养特性、染色特性及生化鉴定均符合大肠埃希菌的菌株,绵羊血平板上均为β溶血,表明溶血性大肠杆菌是引起犊牛腹泻死亡的主要病原之一。(2)采用O抗原凝集试验对新疆南北疆4个地区6个规模化牛场的29株代表株进行O血清型鉴定,其中10株被定型,共覆盖8种血清型,分别是O101、O7、O11、O20、O30、O44、O1、O76,且存在明显的地区性差异。(3)采用黏附素和肠毒素基因多重PCR检测的方法从53株分离株中检出49株同时含有黏附素基因K99、F41和肠毒素基因STa的菌株,阳性率为92.5%,表明多数分离株携带K99、F41和Sta毒力因子,为产肠毒素性大肠杆菌。(4)药敏结果显示:53株分离株对抗生素的敏感程度不同,且存在区域差异,多数分离株对阿莫西林、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢拉啶、头孢噻吩、庆大霉素、环丙沙星等耐药;对阿米卡星、头孢西丁现较高敏感性。(5)10株不同地区来源代表株的纯培养物经腹腔注射小鼠后,感染小鼠均在12~36h死亡,其中9株可致小鼠在12h内死亡,而10只生理盐水对照组小鼠健活。无菌采取死亡小鼠肝脏,进行细菌分离鉴定,获得形态、生化鉴定均符合大肠杆菌的菌株,表明分离株具有较强的致病性。综上研究结果表明:携带K99、F41菌毛及Sta的产肠毒性大肠杆菌是引起这6个牛场初生犊牛腹泻并造成死亡的主要病原之一,同时也初步揭示了该地区牛源大肠杆菌的耐药情况及毒力基因的流行情况,可为该地区犊牛大肠杆菌性腹泻的药物和免疫防治提供科学参考。
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