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本文以泥螺粘液为原料,利用提取、分离和纯化技术,仪器分析和体外生物活性实验,对泥螺粘液多糖进行了系统研究。
通过四因素三水平的正交试验得到了泥螺粘液多糖的最佳提取工艺:浸提温度为4℃,浸提时间为72 h,乙醇与粘液体积比为3:1,pH为7.0。采用柱分离技术得到三种泥螺粘液多糖(BEPA,BEPB1和BEPB2),并通过醋酸纤维薄膜电泳和凝胶过滤的方法,确定了三种多糖均为单一的纯多糖。
通过高效液相凝胶色谱(HPGPC)测得三种多糖的分子量分别为22,977 Da,64,117Da和47,507 Da。紫外光谱扫描后,确定了三种多糖中均不含蛋白质和核酸。采用高效毛细管电泳法(HPCE)确定了三种多糖的单糖组成,通过红外光谱、高碘酸氧化和核磁共振方法,分析得到了主要官能团和糖苷键信息。其中BEPA主要由鼠李糖,葡萄糖,甘露糖,阿拉伯糖和岩藻糖组成,其组成含量比为42:10:40:18:11,糖苷键的连接方式为1→2或1→4键,是硫酸化的β-吡喃糖;BEPB1主要由鼠李糖,葡萄糖,甘露糖,阿拉伯糖,岩藻糖和半乳糖组成,其组成含量比为46:8:17:44:7:6,BEPB2主要由甘露糖,阿拉伯糖,岩藻糖和半乳糖组成,其组成含量比为64:25:16:13,BEPB1和BEPB2糖苷键的连接方式均表现为1→3和1→6键,基本上不含1→2和1→4键,是含有α-和β-两种构型的吡喃糖。综合以上结构信息,对三种多糖的一级结构进行了推断。
在三种多糖的体外生物活性实验中,抑菌实验的结果表明,三种多糖对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)没有抑制作用;在体外抗氧化实验中,三种多糖均表现出了不同程度的抗氧化活性,且随多糖浓度的增加而增大;在研究三种多糖对B16细胞生长及黑色素生成抑制的实验中,BEPA对B16细胞的生长有较强的抑制作用,其IC50值为23.65μg/ml,BEPB1和BEPB2对B16细胞的生长抑制效果不显著。三种多糖对B16细胞黑色素生成的抑制作用,主要源于对其细胞增殖的抑制作用,当药物浓度为20μg/ml时,三种泥螺粘液多糖(BEPA,BEPB1,BEPB2)对黑色素生成的抑制率分别为0.46%,1.57%和1.89%。