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氨酰tRNA合成酶(Aminoacyl-tRNA synthetase,AARS)是一类催化氨酰化反应的酶,它在蛋白质合成过程中将氨基酸连接到对应的同源tRNA上。除了经典功能外,氨酰tRNA合成酶还有许多非经典功能。谷氨酰胺-tRNA合成酶(glutamine tRNA synthetase,Gln RS,QRS)是氨酰tRNA合成酶中的一种。谷氨酰胺-tRNA合成酶存在一种剪接体QRS-C13,它缺失了谷氨酰胺-tRNA合成酶的核心催化结构域,丧失了催化功能。那么QRS-C13与哪些蛋白之间存在相互作用?在细胞内QRS-C13通过什么样的作用机制发挥它的功能?我们通过比较QRS和QRS-C13结合蛋白之间的差异,筛选与QRS-C13特异作用的蛋白,这对了解QRS-C13的功能及其作用机制,发现QRS的非经典功能具有重要意义。本研究在Hela细胞中转染重组质粒p IRESpuro2-QRS-C13和p IRESpuro2-QRS,通过免疫共沉淀比较发现QRS-C13与QRS的结合蛋白之间存在很大差异,选取差异蛋白进行质谱分析,发现与QRS-C13专一作用蛋白可能是真核翻译起始因子3亚基L(Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit L,e IF3L),亮氨酰tRNA合成酶(leucyl-tRNA synthetase,LRS)。Western-blot验证QRS-C13与e IF3L之间存在相互作用。通过构建重组质粒p ET20b-QRS-C13,p GEx-4T-2-e IF3L,p GEx-4T-2-LRS,在大肠杆菌中成功诱导表达获得了QRS-C13,e IF3L,LRS蛋白。体外GST-pull down实验发现QRS-C13与e IF3L之间为间接相互作用,QRS-C13与亮氨酰tRNA合成酶(LRS)之间存在直接相互作用,e IF3L与LRS之间存在直接相互作用。由此我们推测QRS-C13与e IF3L之间的相互作用需要LRS的参与,QRS-C13,e IF3L和LRS在细胞中形成复合体执行功能。通过细胞定位实验,发现QRS-C13主要集中细胞核中,e IF3L主要集中在细胞质中,我们推测QRS-C13可能参与细胞核内的相关生命活动。本文的研究结果对QRS-C13的功能研究奠定基础,同时也为QRS的非经典功能研究提供参考。