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原始生殖细胞(PGCs)的发育与迁移，是哺乳动物配子发生和发育生物学的基本问题之一。PGCs的分离培养，对胚胎生殖(EG)细胞的建系是至关重要的。由于EG细胞在形态学、分子标志与体内外分化潜能等方面都与ES细胞相似，并被证实具有种系传递能力，因此，分离培养PGCs已经成为获得多能干细胞的一条重要途径。本研究以小鼠、猪胚胎为材料，对不同胚龄小鼠生殖嵴的发育进行形态学比较研究，通过对PGCs在生殖嵴中的AP染色定位观察，比较其数量的增殖规律；通过采集不同日龄昆明小鼠PGCs，探讨并优化其分离培养程序；并从猪胚胎生殖嵴中分离PGCs，进行原代培养与传代，对影响PGCs分离和培养的因素进行探讨。本研究包括如下试验： 试验1 小鼠胚胎不同发育阶段生殖嵴的形态学研究 本试验以昆明小鼠胚胎为材料，对不同胚龄的生殖嵴进行形态学比较研究，通过对PGCs在生殖嵴中的AP染色定位观察，比较其数量的增殖规律，以期为小鼠EG细胞的分离培养提供依据。试验表明，小鼠11.5～13.5dpc胚胎，随胎龄增长生殖嵴的形态发生明显变化，由凸入体腔的原始性索渐变为椭圆形的实质性器官-性腺；AP染色表明，在这个过程中，生殖嵴内的PGCs在不同胎龄的生殖嵴内，数量明显不同，显示出随着胎龄增长，呈数量级增殖的趋势。小鼠11.5～12.5dpc胚胎为采集PGCs的最佳时期。 试验2 小鼠原始生殖细胞的分离培养 本试验分离培养10.5～14.5dpc小鼠胚胎的PGCs，对PGCs的形态特征、体外生长特性进行了探索。试验表明：(1)对PGCs进行鉴定，结果表明分离的PGCs呈圆形或椭圆形，边缘光滑，具有折光性，AP染色呈强阳性。(2)10.5～13.5dpc的PGCs在培养5d后，集落出现高峰期。13.5dpc的PGCs，在培养3d后集落的增殖逐渐平缓；14.5dpc的PGCs则在培养3d后集落数出现下降。总体来看，11.5和12.5dpc小鼠胚胎PGCs，最适于分离培养胚胎生殖(EG)细胞。(3)通过对分离培养的EG细胞集落进行鉴定，表明其形态学特征和AP活性与小鼠ES细胞相似；本试验以STO细胞作饲养层，分离培养小鼠EG细胞，并传至第8代。(4)从传代培养结果来看，采集10.5～12.5dpc胚胎生殖嵴，不仅可获得相当数量的PGCs，集落生长也相对稳定。 试验3 猪原始生殖细胞的分离培养 本试验采集妊娠25～27d猪胚胎的PGCs，以STO细胞作饲养层，用96孔培养板作原代培养，4孔培养板作传代培养。结果表明：(1)