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背景与目的 A型流感病毒含有8条分离的负义RNA基因组片断,核蛋白(nucleoprotein, NP)由节段5编码。NP与病毒的RNA及多聚酶共同装配成RNP复合体,通过NP与RNA、其它病毒蛋白成分及感染细胞上某些大分子之间的相互作用,影响病毒的转录、复制、装配及转运功能,而病毒的复制与转录直接关系到对宿主的侵害,是病毒感染与致病的重要因素。另外核蛋白是细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes, CTL)识别的主要抗原,CTL通过识别感染细胞表面的由MHC Ⅰ类分子提呈的病毒抗原肽,有利于清除病毒及控制感染。由于核蛋白基因相当保守,其抗原肽诱导的细胞免疫反应能够针对同型不同亚型的流感病毒株产生交叉反应。当前的流感病毒亚单位疫苗主要利用表面抗原诱导体液免疫,抗体的株特异性及表面抗原的易变性使疫苗具有很大局限性。因此若能将核蛋白或其抗原肽作为疫苗成分来诱导产生CTL反应,将有可能提供更加广泛、更加有效的保护作用。 本实验拟利用流感病毒株A/Swine/Henan/703/2001(H3N2)构建原核重组质粒pGEX-4T-1-NP,并诱导该原核重组质粒在大肠杆菌中表达核蛋白,从而为进一步探讨核蛋白与宿主免疫反应的关系、利用核蛋白构建病毒亚单位疫苗及其它与核蛋白相关的病毒功能方面研究提供实验基础。 材料与方法 本实验从流感病毒株A/Swine/Henan/703/2001(H3N2)中提取总RNA,通过RT-PCR扩增到带有EcoRI酶切位点的NP全长基因序列;将NP基因片段与pGEM-T Easy克隆质粒连接,将重组子转化JM109感受态菌,利用Amp抗性、蓝白筛选