论文部分内容阅读
从泸州老窖不同窖龄窖池中采集窖壁和窖底泥8份(编号Lj2,Lj4,Lj,8, Lj10,Lj18,Lj19,Lj22),分离纯化得到可培养窖泥细菌59株,采用BOXAIR-PCR、16S rDNA PCR-RFLP,16S rDNA序列分析等方法研究了供试细菌的遗传多样性和系统发育。进而,采用形态学、生理生化特征测定,全细胞脂肪酸组分分析、16S rDNA序列、(G+C) mol%和DNA同源性测定等方法,确定了从从泸州老窖不同窖龄窖池中分离出的4个细菌的分类地位。结论如下：1. BOXAIR-PCR聚类分析中,在66%相似性水平上,59个菌株聚为一群；而在80%的相似性水平上,除8株菌单独成群外,其余菌株分为9个遗传群。所有细菌,分离自Lj8的聚成2个群,分离自Lj4,lj10的聚成4个群,分离自Lj12, Lj19, Lj3的聚成3个群,分离自Lj22的聚成5个群,分离自Lj10聚成7个群,表现出较为丰富的遗传多样性。2.根据BOXAIR-PCR分析结果,对其中54株细菌进行16S rRNA PCR-RFLP分析,聚类分析结果表明,这些菌株95%相似性水平上,供试菌株分成8个遗传群,有14个菌株单独聚群。3.对31个代表菌株16S rRNA基因序列进行了测定,MEGA5.0构建了细菌的系统发育树。结果表明,代表菌株形成了2个系统发育分支,芽孢杆菌属(Bacillus)和类芽孢杆菌属(Paenibacillus),以芽孢杆菌(Bacillus)为优势菌群,芽孢杆菌(Bacillus)分布于9个种水平的分支上,表现出了丰富的种群多样性。两个老窖中,从Lj2中分离的LZ015属于B. methylotrophicus, LZ0019属于B.subtilis, LZ018属于B.cereus ATCC14579T,其中LZ018是老窖特有。从Lj4中分离的LZ004属于B.methylotrophicus,LZ002属于B.licheniformis。其中细菌新种LZ003分离自Lj4,LZ013分离自Lj19, LZ033和LZ035分离自Lj22。4.采用多相分类技术,最终确定了4个窖泥细菌新种群的分类地位。菌株LZ003与16S rDNA全序列同源性最高的模式菌株Paenibacillus favisporus LMG20987T,Paenibacillus azoreducens LMG21668T的DNA-DNA杂交值分别为49.43%、32.87%。菌株LZ013与16SrDNA全序列同源性最高的两株模式菌株Bacillus sonorensis IAM12232T,Bacillus licheniformis IAM2505T的DNA-DNA杂交值分别为37.08%、36.04%。菌株LZ033与模式菌株Paenibacillus cookii LMG18419T,Paenibacillus chibensis IAM9905T的DNA-DNA杂交值分别为36.60%、23.13%。菌株LZ035与模式菌株Bacillus coagulans IAM2257T,Bacillus acidiproducens IAM14638T的DNA-DNA杂交值分别为48.39%,43.47%。将四个细菌新种分别命名为泸型类芽孢杆菌(Paenibacillus luxingense),泸州类芽孢杆菌(Paenibacillus luzhouense);江阳芽孢杆菌(Bacillus jiangyangense)和老窖芽孢杆菌(Bacillus laojiaoense);模式菌株分别为Paenibacillus luxingense LZ003T, Paenibacillus luzhouense LZ033T,Bacillus jiangyangense LZ013T,Bacillus laojiaoense LZ035T。