甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究

来源 :西南师范大学生命科学学院 西南师范大学 西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lqwhappy
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甲型肝炎是由一种经由肠道传染的病毒即甲型肝炎病毒(HAV)感染肝脏细胞而引起的急性传染病,是严重威胁人类健康的世界性传染病。转基因植物食用疫苗具有接种简便、成本低廉的优点,是目前正在进行的一项新的探索。 本研究选用柑桔作为表达甲肝病毒衣壳蛋白的生物反应器,将果实作为可以直接口服的疫苗,旨在探索一种甲肝疫苗新途径。HAV基因组编码的衣壳蛋白决定病毒的抗原性、免疫原性和对敏感细胞的吸附性,是探索、研究基因工程疫苗的焦点。为实现HAV衣壳蛋白基因(HAV-CP)这个重要功能基因的表达调控,选用含有花椰菜花叶病毒启动子(CaMV 35S启动子)的植物表达载体pBI121作为基本框架,将HAV-CP基因插入质粒T-DNA左右边界区间内,构建pBI121-HAV-CP植物表达载体。经限制性内切酶分析和PCR鉴定后,利用冻融法将重组质粒pBI121-HAV-CP导入根癌农杆菌LBA4404中。以锦橙上胚轴为转化受体材料,农杆菌浸染10分钟,共培养2天。头孢霉素脱菌培养后选用50 mg/L Km进行筛选培养,120株外植体中筛选出13株拟转化芽,微嫁接于砧木,经PCR检测有5株已导入外源目的基因。
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