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本课题在大鼠异位节段小肠移植模型基础上,采用门静脉与尾静脉两种途径输入供体骨髓细胞,从基因水平揭示不同骨髓细胞输入途径对诱导大鼠SBT免疫耐受的效果和机制。
目的 :1、建立大鼠异位节段小肠移植模型,总结手术技巧和经验,提高手术成功率。2、经受体大鼠门静脉和尾静脉两种不同途径输入供体大鼠的骨髓细胞,观察这两种途径建立的混合嵌合体状态对大鼠SBT。免疫耐受的影响,并探讨其可能的机制。
方法: 1、建立大鼠异位节段小肠移植模型:对50只雄性SD、50只雌性Wistar大鼠施行50次异位节段小肠移植,手术采用肠系膜上动脉-腹主动脉端侧吻合以及门静脉-左肾静脉套管吻合重建供肠血管,远端肠管腹壁造瘘。
2、取雄性BN大鼠40只为供体、雌性Lewis大鼠40只为受体建立异位SBT模型,随机分为4组:BN—Lewis组、BN—Lewis+Fk506组、BN—Lewis+BM(Portal iv)+Fk506组、BN—Lewis+BM(Tailiv)+Fk506组。
3、各实验组在术后不同时间点(第0d、3d、7d、14d、21d、30d、60d或90d)观察大鼠精神和营养状态、测定体重变化及生存时间分析,并于术后第7d,14d,30d、60d或90d制作移植小肠的病理切片评估排斥反应程度。
4、分别于术后7d、14d、21d、30d留取受体血清,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)测定血清中IL-2、IL-10水平。并于术后60d应用原位荧光杂交定位检测以及实时定量聚合酶链反应(Realtime-Polymerase Chain Reaction,Realtime-PCR)技术分析供体雄性细胞的SRY(Sex-determining Region of Y chromosome,SRY)基因在移植术后受体雌性大鼠血液、肝脏及脾脏中的嵌合情况。
结论:1、注重手术细节是成功建立SBT模型的关键;建立恒定、可靠的异位节段小肠移植模型是研究SBT免疫耐受的基础。2、输入供体骨髓细胞可能通过建立稳定的混和嵌合体状态,并促使Th1/Th2平衡向Th2倾斜而诱导SBT免疫耐受。3、国内外首次报道经门静脉途径输入供体BMC可进一步加强对SBT免疫耐受的诱导,其机制可能是通过肝窦内皮细胞对BMC的滞留和保护作用。