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背景恶性肿瘤的发生、发展过程是一个多基因,多阶段调控的复杂过程,其中涉及到多种癌基因的激活或者抑癌基因的失活。由于各种原因导致的癌基因的表达升高或者抑癌基因的表达下降又会引起相应信号级联通路上其它分子水平的变化,从而进一步影响细胞的生物学行为。研究证明,趋化因子及其受体与肿瘤的发生、发展关系密切。CXCR7作为一种趋化因子受体,与相应的配体结合后能参与多种恶性肿瘤的调控。然而,目前CXCR7在食管癌中的表达及作用知之甚少。目的分析趋化因子受体CXCR7在食管癌中的表达水平及其与食管癌细胞增殖之间的关系。初步探讨CXCR7在肿瘤发生、发展进程中的作用,为发现食管癌治疗领域新的分子靶点及临床诊治提供一定的理论依据。方法1.从14例食管癌组织及相应的癌旁正常组织中提取总RNA,然后反转录生成cDNA。应用q RT-PCR技术检测食管癌组织及正常组织中CXCR7 mRNA的表达水平;2.设计合成野生型和突变型CXCR7的特异性引物,应用PCR技术扩增人CXCR7野生型和突变型cDNA全长,通过双酶切和定向克隆技术将其与p EGFP-N1载体连接,分别构建野生型和突变型CXCR7过表达质粒p EGFP-wt CXCR7和p EGFP-CXCR7ΔC;设计合成靶向CXCR7基因的短发夹RNA(sh RNA),并将其插入p Silencer4.1-CMV neo载体,构建CXCR7 sh RNA干扰质粒p Silencer4.1-sh CXCR7;3.将以上构建好的重组质粒分别转染人食管癌细胞KYSE-510,48h后观察它们对食管癌细胞生物学的影响并拍照,利用Western blot实验检测重组质粒在食管癌细胞中的表达。4.将以上构建好的重组质粒分别转染人食管癌细胞KYSE-510,MTT实验检测0h、24h、48h和72h实验组和对照组细胞光密度值,分析重组质粒表达后对细胞增殖的影响。结果1.在食管癌组织中CXCR7 mRNA相对表达量(3.024±2.910)高于癌旁正常组织(1.446±1.118),差异有统计学意义(P<0.05)。2.成功构建了表达质粒p EGFP-wt CXCR7、p EGFP-CXCR7ΔC和p Silencer4.1-sh CXCR7,重组质粒转染食管癌细胞后能够在细胞内成功表达。3.MTT实验检测转染后24h、48h和72h各组细胞的OD值,野生组(0.663±0.032、1.120±0.032、1.343±0.037)和突变组(0.573±0.031、0.948±0.050、1.189±0.024)均高于对照组(0.469±0.027、0.768±0.031、0.991±0.041),野生组OD值高于突变组,差异具有统计学意义(P<0.01);干扰组(0.561±0.025、1.012±0.026、1.303±0.028)高于对照组(0.449±0.031、0.748±0.033、1.039±0.037),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论1.CXCR7在食管癌中高表达,提示其与食管癌的形成关系密切。2.CXCR7表达水平上调和下调后均促进了食管癌细胞的增殖,提示其可能通过直接或者间接途径发挥对肿瘤细胞的调节作用。3.野生型CXCR7比突变型CXCR7更能促进细胞的增殖,提示CXCR7碳末端在发挥其基因功能上有着不可或缺的作用。