着色性干皮病基因C(Xeroderma pigmentosum group C,XPC)核苷酸切除修复(Nucleotied Excision Repair,NER)中最早的DNA损伤识别蛋白,XPC蛋白可与HHR23B蛋白紧密结合形成一个异二聚体,研究表明XPC-HR23B复合体是第一个识别并结合在损伤位点的蛋白成分。XPC蛋白在DNA损伤诱导的其他细胞反应中也扮演重要角色,包括细胞周期检查点的调节、细胞凋亡等等。XPC在膀胱癌中的表达明显明显低于正常组织和细胞,这提示XPC的转录抑制与膀胱肿瘤的发生、发展相关。目前关于XPC的转录调控机制尚不十分清楚,为了研究XPC基因的转录调控机制及其转录抑制与膀胱癌的发生、发展的相关性,我们进行了如下的研究:1.XPC蛋白水平减低预示膀胱癌患者预后不良用石蜡包埋的膀胱癌全切术后标本做免疫组织化学的方法检测XPC水平。K Kaplan-Meier方法分析证实XPC低水平表达的膀胱癌患者生存时间明显低于XPC高表达的患者。同时Cox分析进一步得出,XPC蛋白水平可以作为膀胱癌患者的一个独立的预后因素。2.膀胱癌组织中人XPC基因启动子CpG岛甲基化状态的研究运用“MethPrimer”软件对XPC启动子区进行分析,预测CpG岛,通过硫化测序PCR (Bisulfite sequencing PCR, BSP),检测XPC启动子区CpG岛的甲基化状况,结果显示:膀胱癌组织中XPC基因启动子区存在CpG岛的甲基化,这可能是其在膀胱癌中表达下降的原因之一。3.人XPC基因启动子的活性分析通过生物信息学预测软件(http://www.fruitfly.org/ cgi-bin/seq_tools/promoter.pl.)对人XPC基因的5′侧翼区约2000bp的序列进行分析,预测5′侧翼区内具有启动子功能的区域。应用TransFac professional 8.1(http://jupiter.coh.org/ cgi-bin/transfac/bin/start.cgi)软件对该区域进行分析,获得可能的转录因子结合位点。通过构建包含XPC基因5′上游序列的荧光素酶报告质粒,利用脂质体瞬时转染,检测荧光素酶活性,对XPC启动子区进行分析,结果显示,启动子活性最小区域位于-43 ~ -27bp,预测结果表明,在这一区域可能存在着CREB1转录因子结合位点。4.细胞内、细胞外鉴定CREB1与XPC基因启动子活性区域的结合染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)及电泳迁移率变动实验(electrophoresis mobility shift and supershift assay, EMSA)证明:CREB1可在细胞内、细胞外与XPC启动子区域相结合。5.CREB1对XPC基因启动子活性的调控CREB1真核表达质粒与XPC启动子重组报告基因质粒或与突变报告基因质粒(含转录因子结合位点突变)的共转染实验表明:CREB1通过与XPC启动子-43 ~ -27bp区域结合,调节XPC启动子的活性, Western blot进一步证明:PKA抑制剂H89可以抑制UV-C诱导的HEK293细胞中XPC的表达。6.XPC启动子报告质粒经SssI甲基化处理后极大的降低了它的启动子活性,EMSA检测结果表明位点特异性甲基化会影响其CREB1与XPC启动子上的顺式作用元件的结合。本研究对人XPC基因5′侧翼区序列进行了一系列缺失分析,确定了启动子的最小活性区域-43 ~ -27bp,并鉴定了与之相结合的转录因子CREB1对XPC启动子的调节作用。此外,我们还从表观遗传学调控方面研究了XPC基因启动子CpG岛的甲基化状态,发现膀胱癌组织中XPC基因启动子区存在CpG岛的甲基化,证明了XPC在膀胱癌中的转录抑制与XPC启动子CpG岛的甲基化相关,而XPC低表达则预示着膀胱癌患者的预后不良。本研究结果为阐明XPC基因自身转录调控机制以及XPC的转录抑制与肿瘤的相关性奠定了基础。