细胞工厂是以聚苯乙烯(PS)为材料,采用静止培养的方式,能在有限的空间内充分利用表面培养的一种细胞培养装置,已越来越多的应用到疫苗等生物制品的生产制备领域。国外是一次性使用,国内都是反复使用,从疫苗质量和生产成本综合考虑,这已成为细胞工厂在疫苗生产中的应用关键。目前,用于辐射灭菌的高能射线主要有两种:一种是放射性同位素60Co-γ射线,另一种是电子加速器产生的高能电子束。γ射线在辐照灭菌方面的研究较早,应用也比较广泛。随着电子加速器装置,特别是束下装置的不断完善,电子束辐照在辐照灭菌方面有很大的优势,研究和应用也随之增加。本文以细胞工厂为材料,研究了不同剂量的60Co-γ射线和电子束对其辐照灭菌后,培养2BS细胞、培养HAV L-A-1减毒株及制备病毒收获液,通过不同的指标确定最优灭菌剂量和使用次数。在不影响制品质量的同时既能确保细胞工厂辐射灭菌方式能达到生产工艺的无菌需要,灭菌效果符合GMP要求,又能降低60Co和电子束对细胞工厂材质的损害程度,增加细胞工厂的使用次数,做到节能减排、降本增效,为公司的成本降低到最大。主要结论如下:1.初次使用的细胞工厂应用于冻干甲型肝炎减毒活疫苗的2BS细胞培养、HAV L-A-1减毒株病毒培养及病毒收获液制备,显微镜下观察,细胞均能够呈致密单层纤维状,且细胞计数、病毒滴度、支原体、无菌等各项检测指标及成品牛血清白蛋白残留量、三氯甲烷残留量、细菌内毒素、异常毒性检测结果均符合现行版中国药典和GMP要求,表明细胞工厂可用于冻干甲型肝炎减毒活疫苗的生产制备。2.对不同剂量的60Co-γ射线和电子束对细胞工厂辐照灭菌的效果进行了研究:15k Gy的60Co-γ射线和电子束不能满足对细胞工厂的灭菌要求;20k Gy的60Co-γ射线和电子束只能满足10层细胞工厂辐照灭菌要求且可重复6次使用,不能满足40层细胞工厂辐照灭菌要求;25k Gy、30k Gy、35k Gy3个辐射剂量的60Co-γ射线和电子束都可以有效的对细胞工厂进行灭菌,能够满足GMP要求的无菌要求,分别用于培养2BS细胞、制备HAV L-A-1减毒株病毒、制备病毒收获液,细胞计数、病毒滴度、无菌、细菌内毒素、支原体、牛血清白蛋白残留量、三氯甲烷残留量及异常毒性检测结果符合现行版中国药典和GMP规定。3.对不同剂量的60Co-γ射线和电子束对短小芽孢杆菌杀灭效果进行了研究:20k Gy、25k Gy、30k Gy、35k Gy4个辐射剂量的60Co-γ射线和电子束对放在细胞工厂表面的106cfu/ml的短小芽孢杆菌能够完全杀灭,25k Gy、30k Gy、35k Gy的60Co-γ射线和电子束对放在细胞工厂中间位置的106cfu/ml的短小芽孢杆菌能够完全杀灭。4.对不同剂量的60Co-γ射线和电子束对细胞工厂颜色、透光率、拉伸强度、弯曲强度、耐压力能力等本身材质的影响进行了研究。结果显示,辐照灭菌会在一定程度上对细胞工厂的微观结构造成影响,随着辐照剂量的增大和使用次数的增多,对细胞工厂的损害越严重。5.综上,25k Gy是60Co-γ射线和电子束对细胞工厂最优的灭菌剂量,并且细胞工厂在第五次的使用上对甲肝疫苗制品无较大影响,细胞工厂亦能够满足冻干甲型肝炎减毒活疫苗制备条件,并且灭菌后保存6个月内能够保证无菌。