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伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus，PRV)引起的家畜和野生动物以发热、奇痒（猪除外）及脑脊髓炎为主要症状一种高度接触性传染病。目前，针对国内广泛使用PRVgE基因缺失苗进行接种免疫，通过检测gE抗体即可区分出疫苗株和野毒株。
本研究利用特异性引物从重组质粒pMD-2E8ScFv和pMD-gE中PCR扩增出2E8基因（抗人红细胞H抗原单链抗体基因）和kgE基因(PRVgE主要抗原编码区)，采用重叠延伸(SOE) PCR法拼接成融合的双功能分子2E8kgE，经BamHI和EcoRI双酶切，纯化后，克隆至BamH1和EcoRI双酶切的表达载体pET-Trx中，构建了原核表达载体pET-Trx-2E8kgE;将pET-Trx-2E8kgE转化至BL21plysS中，在IPTG诱导下表达具有双功能的融合蛋白，经过SDS-PAGE和Western-blot检测；结果表明，重组菌BL21plysS表达出约60.1kD的目的蛋白，与猪伪狂犬病阳性血清发生特异性反应。红细胞凝集试验证实，2E8kgE融合蛋白既能够与人红细胞结合，又能够与PRV抗体反应，具有双功能特性。
以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)—猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为抗原，建立了检测PRV gE抗体的红细胞凝集试验方法：利用方阵滴定试验筛选出最佳抗原工作浓度为55μg/mL，血清最佳稀释度为1：20，作用时间30min，与猪瘟(CSF)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪乙型脑炎（JE）、猪布氏杆菌病(Brucellosis)阳性血清和PRV gE缺失疫苗接种的猪免疫血清均不发生反应，与PRV阳性血清反应出现肉眼可见的凝集圈。与美国进口的PRV抗体检测gE-ELISA诊断试剂盒检测结果比较，50份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。红细胞凝集试验检测方法具有敏感性和特异性较高的特点。
与此同时，该研究以金标免疫层析法为基础，以融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物，以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带，制备了PRVgE抗体检测胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg，检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg，血清最佳稀释度为1：10，作用时间15min，与猪瘟(CSF)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪乙型脑炎（JE）、猪布氏杆菌病(Brucellosis)阳性血清和PRV gE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带，与PRV阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单，肉眼于15min内可判定结果；试纸条在室温保存6个月，其特异性和敏感性没有明显变化；与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较，1170份猪血清的符合率均为90.60％。胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点，可用于PRV野毒感染的快速筛查。