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视黄酸诱导基因蛋白受体(RLRs)是—种重要的模式识别受体(PRR)。RLRs通常可识别胞质内病毒的RNA,从而激活其下游的干扰素表达途径,在先天性免疫反应中发挥着重要作用。目前,RLRs家族包括RIG-I、MDA5和LGP2三个成员。本研究克隆了斑马鱼(Danio rerio)LGP2基因两个剪切异构体,分别命名为Dr LGP2a和Dr LGP2b;用乌鳢水泡病毒(SHVV)感染斑马鱼胚胎成纤维细胞ZF4,研究病毒感染和RLRs途径的关系。主要结果如下:1.克隆并测定了Dr LGP2a和Dr LGP2b全长c DNA序列,其在NCBI数据库的登录号分别是KP341002和KP341003。Dr LGP2a基因c DNA全长2473 bp,其中5’UTR为50 bp,3’UTR 383 bp,开放阅读框(ORF)为2040 bp,编码679 aa。蛋白结构预测表明Dr LGP2a包含一个ATP依赖的DEXDc结构域,一个RNA解旋酶HELICc结构域和一个调控结构域(RD)。Dr LGP2b是Dr LGP2a的剪切异构体,二者都有DEXDc结构域和HELICc结构域,但Dr LGP2b缺乏RD结构域。2.研究SHVV对斑马鱼ZF4细胞的感染特性:病毒N蛋白和G蛋白的m RNA和c RNA在SHVV感染后3小时表达量显著增加,6小时到24小时逐渐减少;干扰素IFN-αm RNA表达量在病毒感染后6小时显著升高,在12小时达到峰值;干扰素诱导相关基因Mx的m RNA表达量在病毒感染后6小时显著升高,在24小时达到峰值;RIG-I、MDA5和LGP2 m RNA的表达在病毒感染后3小时显著增加,6小时表达量达到最高。这些结果表明SHVV感染ZF4细胞可能激活了RLRs介导的干扰素表达途径。为了确认RLRs-IFN信号途径的激活和病毒感染有关,使用SHVV感染和不感染的ZF4细胞总RNA转染ZF4细胞,结果表明只有SHVV感染3个小时的ZF4细胞总RNA才能诱导IFN-α的显著表达,表明SHVV病毒复制中间体可能参与RLRs-IFN途径的激活。3.采用制备的Dr LGP2-DEXDc多克隆抗体,对病毒感染ZF4细胞LGP2两种异构体进行Western blot检测。结果表明Dr LGP2a的表达量是Dr LGP2b的十倍左右。Dr LGP2a的表达量在病毒感染ZF4细胞12小时的时候显著升高,表明两种LGP2异构体可能在RLRs-IFN途径中起到不同的作用。