【摘 要】
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目的 在自身免疫性肝炎和一些病毒性肝炎引起的肝纤维化的发病过程中,激活的免疫细胞及其分泌的细胞因子对肝脏组织直接或间接的破坏作用是一个重要的原因。CD154与其受体CD4
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目的 在自身免疫性肝炎和一些病毒性肝炎引起的肝纤维化的发病过程中,激活的免疫细胞及其分泌的细胞因子对肝脏组织直接或间接的破坏作用是一个重要的原因。CD154与其受体CD40的相互作用是调节体液免疫和细胞免疫的关键因素之一,通过阻断CD40-CD154之间的信号传导已用于一些肺的炎症与纤维化、自身免疫性疾病和动脉粥样硬化症。本研究设想利用表达人的CD154分子的真核表达质粒作为疫苗,免疫小鼠产生抗自身CD154分子的抗体,以阻断CD40-CD154信号,起到抑制细胞免疫及细胞因子分泌,以减轻由反复注射刀豆素蛋白(Concanavalin A, Con A)诱导的肝纤维化的形成。方法 采用重组异种同源人的CD154真核表达质粒(pORF-hCD154,p-hCD154)做DNA疫苗,同时用表达小鼠自身的CD154质粒(pORF-mCD154,p-mCD154)以及空质粒(pORF-mcs,p-c)做为同种及空白对照。首先体外转染真核细胞鉴定这些质粒在真核细胞中的产生CD154的能力。大肠杆菌扩增大量制备去除内毒素的DNA疫苗。Balb/c小鼠尾静脉反复注射Con A诱导肝纤维化形成,同时给予注射DNA疫苗。通过血清酶学变化,观察Con A对肝细胞损伤的情况。肝组织病理切片常规HE、MassonTrichrome染色、银染观察肝脏组织结构、胶原及纤维形成情况。Westernblot及ELISA检测血清中产生的抗体对特异性抗原识别能力。进一步免
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