结核病是由结核分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病。据估计，全球约有20亿的人口感染结核病，精准、及时高效地对结核病病人进行诊断是治疗和控制结核病所必需的。结核菌素实验（PPD）是目前临床诊断牛结核病常规的方法，也是国际动物卫生组织与我国规定的法定检疫手段。然而由于PPD抗原也许包含有与其它分枝杆菌相同的抗原成份,检测时诊断结果假阳性高,而且此诊断方法不能区分自然感染和卡介苗免疫。此外还有其他许多结核杆菌的诊断方法如痰涂、菌培、结核杆菌DNA扩增法检测法等,但这些方法不但需要昂贵的仪器设备和专业的人员操作，而且具有检测时间长、操作过程繁琐、诊断结果敏感性低等缺点,最终导致目前结核病临床检出率低，说明以上检测方法不利于结核病的检测。为此，本实验研究了新型的结核病的快速诊断方法：　　 采用多抗原多组分作为联合诊断抗原的方法，建立一种灵敏度好，高特异性的血清学诊断方法。提取结核分枝杆菌H37Rv的基因组DNA，采用分子克隆表达技术扩增TB9.7、38KD、MPB83和MPB70基因片段，通过pET-32a构建质粒载体pET-32a-TB9.7、pET-32a-38KD、pET-32a-MPB83和pET-32a-MPB70，经测定序列正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析重组蛋白的含量，同时用蛋白纯化试剂盒，完成ESAT-6、CFP10、ACR、Rv2626c、TB9.7、38KD、MPB83、MPB70和FadB4的蛋白纯化，并且进行western blot检测。将九种抗原分别进行iELISA条件的优化，制备可视化简易蛋白芯片，建立“芯片”式iELISA诊断方法，并确定了ELISA诊断方法的判断标准，即S/P≥任一抗原阳性临界值为阳性,S/P<所有抗原阴性临界值为阴性。ELISA方法的特异性为97.5%，敏感性为73.3%。对30份痰检阳性和120份健康人血清样品进行了检测,并与痰检结果比较。30份痰检阳性血清样品中有22份为ELISA检测阳性,阳性符合率为73.3%,120份健康人血清，3份为阳性，其余为阴性，阴性符合率为97.5%,本ELISA方法与痰检诊断方法总符合率为92.7%。试验结果表明,ELISA方法具有较理想的开发和应用前景。