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研究目的:探讨抵当汤治疗膀胱癌的作用靶点、可能作用机制及临床疗效,为抵当汤治疗膀胱癌提供临床应用依据。研究方法:(1)拟收集江苏省中医院泌尿外科门诊及住院非肌层浸润性膀胱癌患者共40例,将其随机分为治疗组及对照组,每组患者至少各20例。对照组予膀胱吉西他滨灌注化疗,治疗组予常规灌注化疗外,另予抵当汤口服,两组分别治疗3个月,疗程结束后对照两组膀胱癌复发率、患者临床症状及各项生化指标;治疗期间采用《EORTC-QLQ-C30》、《QLQ-NMIBC-24》量表进行随访患者的生存质量;(2)基于多个中药与疾病数据库,运用网络药理学筛选潜在作用靶点,分析潜在靶点的生物学功能,构建“中药-靶点-通路-疾病”关系网络。并运用生物信息学方法在人群、基因数据库,探讨核心靶点在组织中的差异表达、人群中的分布以及与预后的相关性。(3)采用体外细胞实验验证抵当汤针对膀胱癌的作用功能,并运用qPCR技术检测抵当汤对候选靶点的调控作用。研究结果:(1)本研究期间实际共纳入44例患者,随机分入抵当汤组与对照组,所有患者均按治疗计划完成治疗周期,并完成《EORTC-QLQ-C30》、《QLQ-NMIBC-24》随访调查问卷。两组患者人群特征分布无明显差异,且在首次量表评分中两组患者在躯体功能、角色功能、情绪功能都显著优于《QLQ-C30》、《NMIBC-24》量表参考值;在疲劳、疼痛、恶心呕吐、气促、失眠和食欲减弱这些方面的评分显著低于参考值,而在便秘以及经济困难方面都较高于参考值,且两组评分无明显差异。比较入组患者治疗前后的各项得分,发现抵当汤组较对照组在躯体功能、角色功能、情绪功能、社会功能、总体健康这五个功能领域有显著的改善,在疲劳、疼痛、失眠、经济困难这四个症状领域同样有缓解。此外,相较对照组,抵当汤组患者在恶心呕吐、食欲减弱、便秘这三个症状领域的得分也有明显降低。两组治疗后的评分进行比较显示,与对照组相比,患者在持续服用抵当汤方药后,在躯体功能以及便秘症状方面有着显著的改善。另外,在针对非肌层浸润性膀胱癌特定量表的评分中,两组患者在首次询问中未出现明显的统计学差异。治疗后所有入组患者在尿路症状、治疗产生问题、未来担心、肠道问题等方面均有显著的改善。同时对治疗后,两组患者的评分进一步分析发现,抵当汤组患者的尿路症状、治疗产生问题以及肠道问题这三个方面较对照组患者的改善更为明显。(2)本部分研究共筛选出21个核心靶点(MTOR,AR,MMP9,CSF2,ALB,FN1,FASLG,JUN,CREB1,CXCL8,ERBB2,CDH1,EGFR,TP53,CDKN2A,PTGS2,MMP2,FLT1,VEGFA,MMP3,PLAU),16条通路,其中4个分子功能版块(酶结合、特定蛋白结合、接触反应活性、蛋白结合),4个细胞组成版块(细胞质囊泡、胞外空间、胞外区、囊泡腔),4个生物过程版块(细胞对化学刺激的反应、化学品反应、药物反应、含氧化合物反应)以及16个通路(膀胱癌通路、癌症途径、癌症微小RNA、内分泌抗性、癌症中的蛋白多糖、Kaposi’s肉瘤相关疱疹病毒感染、类风湿性关节炎、癌症中的转录失调、IL-17信号通路、PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、松弛素信号通路、MAPK信号通路、HIF-1信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化、铂类耐药),构建了抵当汤治疗膀胱癌的作用网络。检测出6个靶点:钙粘蛋白1(CDH1)、环磷腺苷结合蛋白1(CREB1)、菌落刺激因子2(CSF2)、AP-1转录因子(JUN)、基质金属肽酶2(MMP2)和前列腺素-内过氧化物合成酶(PTGS2)在膀胱癌组织中均存在差异表达(P<0.05),其中JUN与MMP2在人群中也存在差异分布(P<0.05)。同时,JUN的表达水平与膀胱癌患者的预后相关(P=0.017)。细胞实验发现抵当汤可抑制膀胱癌细胞的增殖,同时可降低候选靶点JUN的表达(P<0.01);(3)通过体外细胞实验,我们发现抵当汤干预后膀胱癌细胞(J82细胞)增殖情况受到抑制,且呈现浓度依赖性,并确定在以3 g.L-1以下浓度处理24小时后,抑制效果最明显;再进一步的qPCR实验中,我们发现经3 g.L-1浓度抵当汤干预过的J82细胞中JUN靶点的表达量较未经处理的J82细胞的表达量低(0.19±0.02,P<0.01)。研究结论:通过临床观察证实抵当汤可改善非肌层浸润性膀胱癌患者的生活质量,结合网络药理学分析发现抵当汤治疗膀胱癌存在多靶点、多通路的特点,并发现抵当汤可影响靶点JUN的表达并抑制膀胱癌细胞的增殖,为进一步理论研究奠定了良好基础。