脊柱软骨终板细胞凋亡与椎间盘退变关系的研究

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背景和目的:颈椎病是一种常见病和多发病,许多学者都致力于对其发病机制的研究。近年来,有些学者认为,椎间盘细胞会发生凋亡,但是对其在此过程中的病理意义知之甚少。另一方面,随着年龄的发展,软骨终板的厚度会逐渐减少,直至消失,其与年龄间的关系尚未清楚。通过建立脊柱退变的动物模型,探讨脊柱软骨终板细胞凋亡与颈椎间盘退变之间的关系,确定凋亡在其退变过程中的意义,为从根本上防止和治疗颈椎病提供新的思路。方法:选取健康大白鼠24只,随机分为实验组和对照组。实验组沿C1-C7棘突做正中切口,剥离椎旁肌,切除C1-C7的棘上、棘间韧带及两侧关节突关节后外1/2,诱发脊柱加速退变;对照组仅切开皮肤后缝合。分别于9周、18周、36周对两组动物施行过度麻醉处死,完整取下包含上下椎体的椎间盘。对颈椎标本行矢状位切片,分离软骨终板和椎间盘。颈椎间盘按Thompson椎间盘退变病理分级标准进行分级评定。将软骨终板石蜡包埋,切片。做HE染色和Tunnel染色。计数椎间盘软骨终板凋亡数量,评估软骨终板消失状况。结果:1.颈椎间盘退变的组织学表现HE染色切片,评估椎间盘退变程度。9周对照组大鼠颈椎间盘组织结构基本正常。而9周手术组大鼠颈椎间盘出现轻度退变表现,纤维环前缘软骨组织增生,排列有轻度不规则表现,髓核偏向后方,椎体边缘光滑。18周对照组大鼠颈椎间盘与9周对照组基本相似,髓核皱缩,纤维环出现裂隙。18周手术组大鼠颈椎间盘退变明显,纤维环部分纤维化,纤维环和髓核分界不明显,椎体前后缘有骨赘形成。36周对照组大鼠颈椎间盘与18周相比退变明显,36周手术组动物经椎间盘严重退变,纤维环完全纤维化,髓核消失,椎体前后缘骨赘明显。2.HE染色观察颈椎间盘细胞凋亡状况随着年龄增长,退变进展,软骨终板形态学变化显著,退变随时间加速。软骨终板的结构随年龄逐渐退变。早期和术后早期不明显,对照组颈椎间盘软骨终板较厚,可见少量散在分布的软骨陷窝;术后9周对照组和实验组终板结构都出现局部消失,细胞密度变低,可见散在分布的凋亡软骨细胞和凋亡小体。术后18周会出现显著退变,终板消失显著。3.TUNEL染色比较对照组和实验组软骨终板内细胞凋亡率(TUNEL阳性细胞率)尽管前期软骨终板内也存在少量凋亡,但是凋亡主要发生在18周以后。通过照片我们可以发现,9周对照组和实验组软骨终板内凋亡细胞几乎不可见。而18周时这种情况就发生了变化,对照组和实验组出现了明显差别,实验组与对照组相比,凋亡细胞明显增多。36周情况又有所不同,对照组和实验组凋亡细胞数量都比较多,但是没有明显差别。结论:1.脊柱退变模型显著增加了细胞凋亡数量,加速了脊柱退变。2.随年龄增加,软骨终板凋亡细胞数量逐渐增加,软骨终板破坏逐渐增加,颈椎间盘退变过程加速,所以我们认为年龄是颈椎间盘退变的重要因素。3.终板细胞凋亡是椎间盘发生退行性变的重要原因。
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