1研究目的AD是临床痴呆最主要的类型,以进行性神经变性为特征,在疾病的某一阶段还常伴有明显的精神行为异常,严重损伤患者的生活能力和社会功能,同时给家庭和社会亦带来沉重负担,已成为当今老年医学面临的最为严峻的问题之一。综合以往研究,关于AD病理机制存在多种假说,每种假说都与AD大脑一些重要生物化学成分改变相关,特别是涉及重要蛋白质和酶等生物大分子的改变。其中,β-淀粉样蛋白(Ap)假说得到广泛认可,该假说认为Aβ是AD发病的关键环节,其毒性引发的连锁反应是AD一系列病理改变的基础。因此,有效抑制Aβ分泌,干扰Ap毒性引发的连锁反应,打断其恶性循环是治疗AD的一个重要策略。依据导师李志刚教授长期临床经验并且结合前期动物实验研究发现,通督启神针法能够促进神经细胞修复再生,有效改善脊髓损伤、颅脑损伤等与中枢神经系统相关疾病,是一种实用性较强的治疗方法。临床AD具有心理学特性,以往将传统针刺疗法与音乐疗法结合治疗AD的研究尚不多见。本研究以与AD发病密切相关的Aβ蛋白为切入点,首次将音乐电针疗法作为一种干预手段引入AD的治疗中,采用神经行为学、分子生物学等方法,深入探讨通督启神针法指导下的不同电针对AD模型小鼠额叶皮层Aβ蛋白生成途径和清除途径两方面的影响,同时对比分析脉冲电针与音乐电针的疗效差异,以期为临床应用音乐电针治疗AD以及其他脑相关疾病提供科学实验依据。2研究方法本研究采用动物实验方法,以SAMR1和SAMP8小鼠作为研究对象,分为空白对照组(B组)、模型对照组(C组)、药物对照组(D组)、音乐对照组(M组)、音乐电针组(ME组)和脉冲电针组(PE组)6个组别,干预15天后,采用Morris水迷宫实验评估各组小鼠行为学的变化,比较不同电针对学习记忆能力的影响；采用尼氏染色观察各组小鼠额叶皮层神经细胞的病理改变,比较不同电针对细胞形态学的影响；采用免疫组织化学方法和Western Blot方法检测各组小鼠额叶皮层Aβ40和BACE1含量,并应用Real time-PCR法检测BACE1mRNA表达情况,比较不同电针对Aβ生成途径的影响；采用免疫组织化学方法和Western Blot方法检测各组小鼠额叶皮层Aβ降解酶IDE、 NEP以及相关转运受体LRP1、RAGE的表达情况,比较不同电针对Aβ清除途径的影响。3研究结果3.1定位航行实验中,与B组比较,C组小鼠逃避潜伏期基线较高,而且经过5天训练并没有明显缩短,同时游泳总路程基线较低,并且有持续下降趋势。D组、ME组和PE组逃避潜伏期随训练时间增加呈波动性下降趋势,以ME组尤为突出,其出现明显变化时间最早,随后出现明显变化的是D组、PE组,而M组在5天的训练中变化并不明显。在游泳总路程上ME组与C组比较,具有显著性差异,且在某些时间点上优于D组和PE组。在空间探索实验中,与B组比较,C组原平台象限停留时间及游泳路程显著下降,搜索策略多呈随机式,无明显倾向性,而D组、ME组和PE组与C组比较有明显差异,搜索多停留在原平台所在象限或附近,ME组与D组无显著性差异,略优于PE组。3.2B组额叶皮层的神经元体积较大,形态规则,胞浆内布满尼氏体,呈深蓝色。C组额叶皮层的神经元体积较小,形态不规则,有较多细胞失去完整形态,神经元胞浆内尼氏体着色浅淡,有一定程度的脱失。经不同电针及药物干预的治疗组额叶皮层的神经元体积大于C组,但明显小于B组,形态较规则,胞浆内尼氏体有一定程度的恢复。M组较C组形态学无显著性变化。3.3与B组比较,C组Aβ40表达明显升高,差异具有显著性。与C组比较,D组、ME组、PE组Aβ40表达水平均明显下降,但M组无显著性变化。与D组比较,ME组Aβ40表达水平无明显差异,PE组和M组仍明显增高。ME组Aβ40水平与PE组无显著差异。3.4与B组比较,C组小鼠额叶皮层BACE1mRNA相对表达量及BACE1表达水平明显升高。与C组比较,D组、ME组、PE组两指标均有不同程度下调,差异具有显著性,其中ME组与D组作用相当,且略强于PE组,而M组无明显变化。3.5与B组比较,C组IDE、NEP含量均明显降低,差异具有显著性。与C组比较,D组、ME组、PE组两指标表达水均有不同程度提高。在提高IDE表达方面,ME组优于D组和PE组,而在改善NEP表达方面,ME组与PE组无显著性差异,且稍逊于D组。M组两指标的变化无统计学意义。3.6与B组比较,C组LRP1表达水平明显下降,而RAGE明显升高,差异具有显著性。与C组比较,ME组和PE组两指标的表达水平均明显改善,差异具有统计学意义,且ME优于PE,而D组和M组在两个指标的表达上与C组相比无显著性差异。4研究结论4.1通督启神针法指导下的电针疗法对拟AD模型——SAMP8小鼠学习记忆障碍具有改善作用。4.2通督启神针法指导下的电针疗法可修复AD模型——SAMP8小鼠额叶皮层神经细胞的损伤,对神经细胞具有一定的保护作用,并且可以通过纠正Ap代谢障碍,降低Aβ40的表达水平,从而发挥治疗痴呆的作用。4.3通督启神针法指导下的电针疗法发挥纠正Aβ代谢障碍的作用,通过两条途径实现：第一,干预Aβ生成途径。电针通过抑制BACE1表达,减少APP通过淀粉样蛋白源性加工途径产生Aβ；第二,干预Ap清除途径。电针通过增加IDE、NEP等Ap降解酶表达,双向调节Ap蛋白相关转运体LRP1及RAGE水平,促进脑内Aβ降解及转运。4.4音乐电针和脉冲电针均可通过改善神经细胞损伤和纠正Ap代谢障碍,从而促进拟AD模型——SAMP8小鼠学习记忆能力恢复。虽然在下调Aβ40和保护神经细胞方面,音乐电针相对于脉冲电针的优势没有统计学意义,但是在改善行为学及大部分Aβ相关降解酶和转运受体方面,音乐电针的优越性得以体现。综合行为学结果及与Ap代谢相关的分子生物学指标,音乐电针疗法的作用最全面。