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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(diethylhexyl phthalate,DEHP)是一种应用非常广泛的增塑剂。DEHP具有神经毒性,可以对神经细胞造成损伤并产生细胞毒性,长期接触还会损害神经发育以及行为和认知。然而,DEHP诱导的神经毒性的分子机制仍有待研究。在此,我们对三种小鼠源神经细胞系的神经毒性进行比较,以建立适用于DEHP神经毒性作用研究的良好细胞模型。首先,我们通过MTT实验检测了不同浓度DEHP暴露后小鼠神经瘤母细胞系(N2a),分化和未分化的小鼠海马神经元细胞系(HT22)以及小鼠神经干细胞(NE-4C)的细胞活力。结果显示,经DEHP暴露后的细胞活力成剂量依赖式下调,NE-4C的细胞活力在12μM时明显降低,N2a和分化HT22的细胞活力均在50μM的浓度出现下降,未分化HT22的细胞活力则在200μM的较高浓度才出现显著下降。其次,采用Hoechst染色和western blotting检测了不同浓度DEHP暴露后细胞的凋亡情况。结果表明,不同细胞发生显著凋亡时DEHP的暴露浓度不同,NE-4C细胞被诱导发生凋亡的DEHP浓度为12μM,N2a细胞和分化的HT22细胞在100μM时凋亡的细胞明显增加,未分化的HT22细胞发生显著凋亡的浓度达到了200μM。然后,分别检测了经浓度梯度DEHP暴露后,不同细胞内神经突触相关蛋白PSD95和synapsin-1的表达情况。Western blotting结果显示,DEHP的暴露可以下调突触蛋白PSD95和synapsin-1的蛋白表达。PSD95和synapsin-1的蛋白表达量发生显著下调时,暴露浓度分别为N2a细胞100μM,未分化HT22细胞200μM,分化的HT22细胞为50μM,NE-4C细胞为25μM。最后,我们检测了浓度梯度DEHP暴露后,细胞内脑源性神经营养因子(BDNF)和环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化水平。ELISA和western blotting的检测结果显示,N2a和分化的HT22细胞暴露于50μM的DEHP时,未分化的HT22在100μM的浓度时,NE-4C细胞在6μM的浓度时,BDNF的表达量显著降低。p-CREB的表达量被下调时,细胞暴露浓度分别为N2a细胞100μM、未分化HT22细胞200μM、分化的HT22细胞50μM、NE-4C细胞12μM。综上,我们的研究通过对暴露于不同浓度的DEHP的三种小鼠源神经细胞系的形态学及分子水平的比较和分析,确定了三种细胞系中,NE-4C细胞系为DEHP诱导的毒性作用中最为敏感的神经细胞系。因此,NE-4C细胞可以作为今后DEHP神经毒性作用研究的细胞模型,为进一步研究DEHP诱导神经毒性作用的分子机制奠定基础。