论文部分内容阅读
背景沃格特—小柳—原田综合征(Vogt—Koyanagi—Harada syndrome，VKH)发病机制尚不清楚，目前认为与HLA—Ⅱ类基因复合体密切相关。1994年Islam和Shindo等的研究结果认为HLA—DRB1~*0405、DQB1~*0401可能对VKH的易感性起重要作用，我国肖天林、刘勤、张美芬也分别报道了中国南方及北方汉族VKH患者与HLA—Ⅱ类基因复合体编码区具有类似的相关性。但是这些文献对HLA-DQB1等位基因型别的研究方法集中为PCR—SSO和PCR～RFLP，较为费时，操作繁杂；同时尚未见有关VKH患者与HLA—DQB1调控区关系的报告。目的检测我国北方汉族VKH患者HLA—DQB1编码区和启动子区基因型，分析编码区、启动子区、临床表现的相互关系。方法收集我国北方汉族VKH患者外周血88例，应用PCR-SSP法和PCR-SSCP-克隆-测序法分别检测HLA-DQB1编码区和启动子区基因型。结果符合入选标准的VKH患者88例，男性41人，占46.59％，女性47人，占53.41％。发病年龄15.0—67.0岁，平均36.3±11.4岁。HLA—DQB1编码区多态性结果显示，VKH患者／正常人HLA—DQB1各亚型的频率分别为~*0401为31.82％／4.55％，~*0201为17.61％／15.34％，~*0301／~*0304为17.05％／22.73％，~*0602为12.50％／11.93％，~*0303为6.82％／0.57％，~*0302为6.25％／19.32％，~*0402为1.70％／1.14％，~*0502为1.70％／3.98％，~*0601为1.70％／9.66％，~*0501为1.14％／3.41％，~*0503为1.14％／2.27％，~*0604为0.57％／2.84％，~*0603为0.0％／2.27％。VKH患者中HLA—DQB1~*0401(x~2=44.00，P=0.000，OR=9.8)和DQB1~*0303(x~2=9.67，P=0.002，OR=12.81)出现频率高于对照组，差异有统计学意义。而HLA—DQB1~*0601(x~2=10.39，P=0.001，OR=0.16)和HLA—DQB1*0302(x~2=13.48，P=0.000，OR=0.28)在VKH患者中出现频率显著低于对照组，有统计学意义。HLA—DQB1~*0401阳性与阴性VKH患者之间临床表现比较，如年龄、眼外表现、眼部表现及视力预后无统计学意义。HLA—DQB1上游启动子区(QBPl)／调控区(URR)多态性结果显示，正常人和VKH患者HLA—DQB1~*上游启动子区共计有16种SSCP带型，患者集中在2A，4A，4B，4C；正常人集中在2B，3D，分布较为分散。纯合子为两条带，正常人和患者带型出现频率有显著差异(x~2=526.5，P=0.037)；杂合子为3条带(x~2=5.0，P=0.009)或4条带(x~2=61.0，P=0.000)，正常人和患者带型间出现频率有显著统计学差异。对典型带型对应的目的片段连接质粒、转染感受态细胞、增菌培养，并进行DNA序列测序，结果与已命名的序列比对，归为5种QBP1s，与对照组比较，HLA—DQB1一QBP1~*0601频率显著降低(x~2=11.68，P=0.001)。同时发现可能存在12种SNPs，即—21 ACT／———，—40 G／A，—94 G／A，—103 G／A，—151 G／A，—171 G／A，—173 T／C，—182—／A，—182———／AAA，—189 C／A，—214 G／A，—227 G／A，其中—189 C／A在病例组中的分布频率显著高于对照组(x~2=45.92，P=0.000)，而—227 G／A频率低于对照组(x~2=15.63，P=0.000)。综合分析VKH患者调控区和编码区的关系，HLA—DQB1*0401阳性VKH患者51人，阴性37人，其QBP1区PCR—SSCP结果显示：2条带型(x~2=36.0，P=0.000)和4条带型(x~2=48.0，P=0.000)在两组间的频率比较有统计学意义，而3条带型两组间的患者均较少，未发现有统计学差异(x~2=0.3，P=0.564)；编码区HLA—DQB1~*0401，—DQB1~*0601以及上游调控区序列QBP1~*0601之间存在一定的累积效应；单核苷酸多态性—189 C／A和—227 G／A与HLA—DQB1~*0401和HLA—DQB~*0601之间也存在累积效应。结论1)HLA—DQB1"0401和DQB1*0303与VKH遗传易感性密切相关，而HLA—DQB1*0601和DQB1*0302则与VKH遗传抵抗性密切相关，HLA—DQB1*0401同临床表现无明显相关性。2)PCR—SSP可用于快速检测HLA—DQB1等位基因型别。3)VKH患者启动子区存在12种SNPs，其中—189 C／A是其易感SNP，而—227 G／A是抗性SNP，HLA—QBP1*0601是抗性等位基因；4)上游调控区等位基因—QBP1*0601和SNPs(—189 C／A，—227 G／A)与编码区—DQB1*0401和—DQB1*0601之间具有累积效应。