【摘 要】
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与生殖相关蛋白的研究已进展到基因水平。生精过程中的基因表达存在复杂的多级调控机制。我们曾经采用一株具有抑制生育作用的抗精子膜蛋白单克隆抗体YWK-Ⅱ对大鼠睾丸λgt11 cDNA表达型文库进行表位筛选,得到一1.8kb大小的cDNA,命名为RSD-2。同源性分析发现,RSD2的编码多肽与引起老年性痴呆症的A4蛋白前体(APP)跨膜区高度同源,表明这是一个含有单跨膜区的膜镶嵌蛋白。随后,以RSD-2
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与生殖相关蛋白的研究已进展到基因水平。生精过程中的基因表达存在复杂的多级调控机制。我们曾经采用一株具有抑制生育作用的抗精子膜蛋白单克隆抗体YWK-Ⅱ对大鼠睾丸λgt11 cDNA表达型文库进行表位筛选,得到一1.8kb大小的cDNA,命名为RSD-2。同源性分析发现,RSD2的编码多肽与引起老年性痴呆症的A4蛋白前体(APP)跨膜区高度同源,表明这是一个含有单跨膜区的膜镶嵌蛋白。随后,以RSD-2为探针进一步从人睾丸λgt11 cDNA文库中筛到了HSD2-7,921,721,1062等多个阳性克隆。对它们的核苷酸序列的初步分析发现,它们之间存在同源和变异,而且5′端都不完整。本论文是在此工作的基础上进行了进一步的研究。首先,对721(1.9kb),1062(1.9kb)两个cDNA片段进行了全部核苷酸序列手工测定,同源比较发现,721cDNA在编码区内存在189bp(63个氨基酸残基)的缺失。而1062cDNA则没有这段缺失,但在3′非翻译区内有230bp与我们前面报道的921不同源。进一步的分析发现在睾丸组织中至少有4种形式的mRNA对应于YWK-Ⅱ抗原,其同源区的同源率高达100%,提示这可能是同一基因转录的、不同方式剪切的产物。其次,为获得完整的5′端,我们以HSD2-7的5′端500bp为探针,从人睾丸λgt10 5′stretch cDNA文库中做了进一步的筛选,获得一个4kb大小的cDNA,命名为C211。序列分析比较发现,除了在胞外区接近膜处有一36bp(12氨基酸残基)缺失外,5′端1.8kb有极大变异。计算机分析显示,该1.8kb是一非编码区。连接219个氨基酸残基构成的胞外区及23个氨基酸残基的跨膜区和47个氨基酸的胞内区。由于这一段1.8kb变异比较特殊,我们用PCR和RT-PCR的方法,分别证明了该变异区确实存在于λgt10 cDNA文库和人睾丸组织mRNA中,而非片段污染所致。我们选用C211 cDNA的3′端同源区1.8kb为探针,对人睾丸组织RNA进行了Northern blot分析,结果检测到一4kb大小的杂交带。为进一步探讨该mRNA在睾丸组
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