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猪干扰素-γ(PoIFN-γ)是由激活的T细胞和NK细胞产生的一类细胞因子，它具有高效的抗病毒感染、抑制肿瘤细胞生长和调节机体免疫功能的作用，作为生物药剂和疫苗佐剂具有广阔的应用前景。为了更好地利用基因工程技术来开发重组猪干扰素-γ制剂，本研究将去除信号肽的猪干扰素-γ基因置于毕赤酵母a因子分泌信号的DNA序列后，构建成能分泌表达PoIFN-γ蛋白的重组表达载体pPIC9K-PoIFN-γ，然后将其导入高效表达系统—毕赤酵母中。培养毕赤酵母，表达PoIFN-γ蛋白，测定其效价，为PoIFN-γ进一步的研究与开发打下基础。本研究的主要结果如下：1、用Oligo.exe(3.3)软件设计一对引物，以携带猪IFN-γ全基因的重组质粒PMD-18T-PoIFN-γ为模板，通过PCR方法，扩增出长约441bp左右的特异性条带，胶回收该片段，用EcoRⅠ和NotⅠ分别双酶切克隆质粒PoIFN-γ成熟蛋白基因片段和pPIC9K质粒，回收并用连接试剂盒酶连接目的片段，转化大肠杆菌，质粒抽提、酶切及PCR鉴定。结果表明，表达载体pPIC9K-PoIFN-γ得以成功构建，DNA测序结果表明，PoIFN-γ成熟蛋白基因表达片段定向插入到表达载体启动子下并形成正确的开放阅读框(ORF)。2、用salⅠ酶切pPIC9K-PoIFN-γ重组质粒，采用原生质体法转化毕赤酵母，通过MD平板和G418抗性筛选，得到重组转化子53个。用特异性引物，在提取质粒之后，对转化菌株进行PCR鉴定，结果显示扩增出了特异条带，表明外源基因整合进了宿主细胞。同时SDS-PAGE鉴定、效价测定等实验结果也表明重组菌株得以成功转化。3、重组酵母菌株通过MGY培养基培养，对其上清液直接进行SDS-PAGE分析，没有发现17KD左右的蛋白质条带，但对其进行超声裂解之后，得到了预期的17KD目的蛋白带，并对其超声裂解上清液通过细胞病变抑制法测定蛋白活性。结果表明，重组猪干扰素-γ蛋白能够很好地保护WISH细胞免受VSV水泡性口炎病毒的感染。