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双峰驼是荒漠和半荒漠草原特有的畜种。由于长期生活在恶劣而极端的环境中,双峰驼拥有了很多独特的生物学特性。揭示双峰驼独特的物质代谢途径以及对内源性和外源性化合物的代谢特性有助于人们进一步了解双峰驼的生物学特性。动物CYP酶是代谢药物、外源性化学物质和内源性化合物的超家族酶系。其中CYP2D6酶虽只占肝脏CYP酶系的4%,却承担着约20%左右的药物代谢。为了系统地研究双峰驼CYP2D6酶的动力学特征和对特异性抑制剂的敏感性,本试验通过特异性探针底物法研究了CYP2D6酶的体外活性。首先,使用差速离心法制备双峰驼肝微粒体,并采用BCA法和CO还原差示光谱法分别测定其蛋白浓度、CYP总酶含量和Cytb5含量。结果表明肝微粒体蛋白浓度为5.5650mg/mL±0.5197, CYP总酶含量为0.1777nmol/mg±0.0201, Cytb5含量为0.1177nmol/mg±0.016。能够满足后续双峰驼CYP2D6酶体外活性研究的基本要求。其次,建立符合检测CYP2D6酶特异性底物氢溴酸右美沙芬及其活性代谢产物去甲右美沙芬的高效液相色谱法。采用梯度洗脱方法：0min(甲醇：超纯水=12：88)～10min(甲醇：超纯水=22：78)～30min(甲醇：超纯水=40：60),流速0.5mL/min,柱温28℃,紫外检测波长279nm,进样量8μL。将底物与双峰驼肝微粒体在38℃水浴锅里预孵育5min后,加入β-NADPH溶液继续孵育一定时间,孵育体系经高效液相色谱法检测。在以上色谱条件下,内标间乙酰氨基酚、产物去甲右美沙芬、底物氢溴酸右美沙芬的色谱峰能完全分离,峰形良好,且无其它内源性物质的干扰。它们的保留时间分别是6.012min、8.546min和20.404min。通过检测产物生成量来优化肝微粒体孵育条件,优化后孵育体系最佳肝微粒体蛋白浓度为5.5650mg/mL、最适孵育时间为40min、最适底物浓度为250μg/mL。再次,分别将不同浓度底物经肝微粒体孵育代谢,并采用HPLC方法定量测定产物生成量,然后借助Origin Pro 8.6软件处理实验数据得双峰驼CYP2D6酶的动力学参数Vmax值为0.1416nmol/min/mg±0.0527,Km值为12.986μmol/L±0.3572。同理计算牛的Vmax值为0.0593nmol/min/mg±0.0072,Km值为88.3μmol/L±9.2692。初步判断双峰驼CYP2D6酶活性较牛的CYP2D6酶活性要强。最后,在优化的孵育体系中加入CYP2D6酶的特异性抑制剂奎尼丁,经HPLC法测定代谢产物去甲右美沙芬动态浓度,考察奎尼丁对双峰驼CYP2D6酶是否具有抑制作用。试验结果证明,在相同条件下,加入奎尼丁的试验组产物生成量比未加奎尼丁的对照组产物生成量少很多。说明奎尼丁抑制了CYP2D6酶的活性使产物生成量明显减少。计算得其半数抑制浓度IC50为2.779μmol/L±0.0639,且呈现出时间依赖的特性。因此,通过本试验成功制备并优化了双峰驼肝微粒体孵育体系；建立了稳定、可靠、灵敏而专属性强的CYP2D6酶特异性底物氢溴酸右美沙芬及其主要活性代谢产物去甲右美沙芬的高效液相色谱定量检测法；首次检测并找出了双峰驼CYP2D6酶的主要动力学参数和特异性抑制剂的IC50值。该试验结果填补了双峰驼CYP2D6酶体外活性研究的空白,也能为体内检测CYP2D6酶活性提供一定依据。