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目的:本课题研究安子合剂对抗磷脂抗体(APA)阳性流产小鼠母胎界面Toll样受体2、4(TLR2、TLR4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)及TLR4/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,从该信号通路各因子蛋白和mRNA水平表达探讨其安胎作用机制,为安子合剂治疗APA阳性流产提供新的理论和实验依据。对安子合剂的HPLC指纹图谱进行测定,为研究安子合剂对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的谱效关系打下基础,进一步揭示安子合剂对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的药效物质基础。方法:1.安子合剂单一剂量对TLR2、TLR4、TNF-α的影响试验:将雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、阿司匹林组(阳性对照,0.0195g/kg)和安子合剂单一剂量组(临床正常剂量,37.7g/kg),每组6只。除空白对照组外,其余各组小鼠均以人β2-糖蛋白I(β2GPI)为诱导剂建立APA阳性流产模型。从妊娠第1天起,阿司匹林组、安子合剂组小鼠灌胃药物,空白对照组、模型组小鼠等体积蒸馏水灌胃,每天1次,连续9天。测定胎鼠及胎盘重量,计算胚胎吸收率,采用酶联免疫吸附法(ELISA)联合检测小鼠外周血清ACA、抗β2GPⅠ抗体浓度和TNF-α含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法测定胎盘组织TLR2、TLR4mRNA水平,免疫组织化学法检测胎盘组织TLR2、TLR4蛋白表达。2.安子合剂多剂量对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响实验:将雌性BALB/c小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、阿司匹林组(0.0195g/kg)和安子合剂低、中、高剂量组(37.7、75.4、150.8g/kg),每组10只。模型建立及给药方式同以上实验。每天1次,连续9天。分别采用RT-PCR法和免疫组织化学法测定胎盘组织该信号通路中关键因子TLR4、髓样分化蛋白2(MD2)、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白表达水平。3.建立安子合剂的HPLC指纹图谱实验:采用高效液相色谱(HPLC)法。色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,体积流量:1.0mL·min-1,柱温:30℃,检测波长:254nm。采用"相似度评价软件(2004A)"处理分析。结果:1.与空白对照组相比,模型组小鼠胎盘组织TLR2、TLR4mRNA水平显著升高,蛋白均呈弥漫性高表达(P<0.01或P<0.001);与模型组相比,安子合剂组能增加胎鼠、胎盘重量(P<0.05或P<0.01),显著减少胚胎吸收率、降低血清ACA浓度(P<0.05),阿司匹林组、安子合剂组均能降低小鼠血清抗β2GP I抗体、TNF-α浓度(P<0.05或P<0.001),下调小鼠胎盘组织TLR2及TLR4mRNA水平,并使TLR2、TLR4蛋白呈中低表达(P<0.05或P<0.01);与阿司匹林组相比,安子合剂组降低抗β2GPI抗体浓度更为明显(P<0.01)。2.与空白对照组比较,模型组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、MyD88、NF-κB mRNA及其蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,阿司匹林组和安子合剂低、中剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、MyD88mRNA及其蛋白表达水平,安子合剂高剂量组小鼠胎盘组织TLR4蛋白表达水平,以及各给药组小鼠胎盘组织NF-κ B蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),且安子合剂低剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2mRNA表达水平和MD2、MyD88蛋白表达水平较阿司匹林组更低(P<0.05或P<0.01)。3.建立安子合剂指纹图谱:确立了 20个共有峰的共有模式,10个批次安子合剂样品指纹图谱各色谱峰的分离较好,符合指纹图谱检测要求。结论:安子合剂抑制APA阳性流产小鼠母胎界面TLR2、TLR4信号转导通路中的上游关键启动子TLR2、TLR4,抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路转导,减少炎症因子释放,这可能是其安胎作用机制之一,同时最佳药效剂量为临床正常用药剂量。对安子合剂建立HPLC指纹图谱,方法可靠、简便易行。