LewisY抗体联合人参皂苷Rg3对A431细胞增殖抑制作用的实验研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zgm_19780916
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LewisY寡糖抗原是肿瘤相关糖抗原,存在于erbB癌基因编码的产物中。此类产物是由上皮生长因子受体和免疫球蛋白超基因家族编码的,与肿瘤的恶性生长、调控和转移有关。其高度表达于多数来源于上皮细胞的恶性肿瘤中。针对LewisY抗原的多种单克隆抗体已经研制成功,它们具有增强抗体依赖细胞毒作用(ADCC)的功效。人参皂苷Rg3是从红参中微量提取的中药单体。近年来的研究发现,Rg3具有许多的医学功能,比如抗感染,防衰老和抗肿瘤作用。其中抗肿瘤的作用机理与抑制肿瘤的新生血管形成、诱导肿瘤细胞凋亡和提高机体免疫力有关。子宫内膜癌在发达西方国家是女性最常见的生殖道恶性肿瘤。其发病率在世界范围内有增高趋势,在我国也明显上升。子宫颈癌与子宫内膜癌的比例已经由8:1上升几乎接近1:1。子宫内膜癌是由子宫体腺上皮发生的。现已证明,在子宫内膜癌、子宫内膜过度增生组织中LewisY抗原阳性表达率几乎达100%。目前,国内外尚未见LewisY抗体在子宫内膜癌治疗方面的研究报道。本实验首次运用靶向LewisY抗原的抗体,结合中药Rg3抗肿瘤的特性,通过体外实验研究两者共同作用对子宫内膜癌细胞的生长影响,为子宫内膜癌的生物治疗奠定了体内实验依据。目的:探讨LewisY抗体联合人参皂苷Rg3对LewisY抗原表达阳性的人子宫内膜移行上皮癌细胞株A431增殖的抑制及诱导此肿瘤细胞调亡的作用。方法:将体外培养细胞分为四组:对照组1.人子宫内膜移行上皮癌细胞株A431组;实验组:2.加入LewisY抗体的子宫内膜移行上皮癌细胞株A431; 3.加入人参皂苷Rg3细胞组4. LewisY抗体与人参皂苷Rg3同时加入的细胞组.利用MTT法比较各组细胞的肿瘤抑制率;流式细胞仪分析各组细胞周期变化及凋亡情况;Hoechst33342荧光染色对各组细胞凋亡的形态学观察;细胞免疫组织化学方法和Western Blot检测各组VEGF蛋白的表达。结果:1) LewisY抗体和Rg3实验组细胞生长速度低于对照组细胞,其细胞生长呈时间和剂量依赖(P<0.05);2)联合使用浓度比为2:100和浓度为20ug/mlRg3在48小时内对人子宫内膜移行上皮癌细胞株A431生长的抑制作用明显优于二者单用(P<0.05);3)流式细胞周期检测两者单用与合用对细胞株A431的凋亡率有明显差异性,分别为7.32%,13.09%,12.57 and 24.91%两者单独使用表现的凋亡率差别不大。细胞周期停滞于G1期,合用组与其它各组之间均有差异性(P<0.05),S期、G1无明显变化;4)实验组细胞的血管内皮生长因子蛋白表达较对照组明显下调。结论:LewisY抗体联合人参皂苷Rg3对人子宫内膜移行上皮癌细胞株A431增殖具有抑制作用,诱导肿瘤细胞调亡的作用显著。并下调血管内皮生长因子的表达,抑制肿瘤血管生长。
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