不同交联剂对贻贝仿生组织粘接剂粘接性能及细胞毒性的影响

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:silvervan
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[目的]研究一种新型贻贝仿生组织粘接剂—己二胺改性的柠檬酸基贻贝仿生组织粘接剂(DAH-iCMBAs)在交联时,不同交联剂对其粘接性能及细胞毒性的影响。[方法]选用相对分子质量400的聚乙二醇,反应物添加比例中:盐酸多巴胺为聚乙二醇摩尔添加量的50%,己二胺为聚乙二醇摩尔添加量的10%,合成贻贝仿生组织粘接剂DAH-iCMBAs。在探讨不同交联剂对贻贝仿生组织粘接剂粘接性能的影响时,通过搭接剪切强度试验测定不同交联剂交联的DAH-iCMBAs搭接剪切强度大小,实验中以一定浓度高碘酸钠溶液(PI)、氯化铁溶液和氢氧化钠溶液(二者以下简称为Fe3+)、硝酸银溶液(SN)交联的DAH-iCMBAs预聚物为实验组,纤维蛋白胶(FG)为对照组。细胞毒性实验中,预聚物的细胞毒性实验:以DAH-iCMBAs预聚物为实验组,甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)为阳性对照组,可注射的柠檬酸基贻贝仿生组织粘接剂(iCMBAs)预聚物为阴性对照组,完全培养基为空白对照组;聚合物的析出物溶液细胞毒性实验:以一定浓度的PI、Fe3+、SN交联的DAH-iCMBAs为实验组,FG为阳性对照组,完全培养基为空白对照组;聚合物的降解溶液细胞毒性实验:以一定浓度的PI、Fe3+、SN交联的DAH-iCMBAs为实验组,聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为阳性对照组,完全培养基为空白对照组。采用Counting Kit-8(CCK-8)检测预聚物、聚合物析出物溶液、聚合物降解溶液对于细胞增殖活性的影响。此外,通过预实验及产品建议确定细胞活死染色试剂盒最佳染色剂浓度,后续通过相应浓度活死细胞染色试剂染色,在荧光显微镜下观察聚合物析出物溶液对细胞增殖活性的影响。[结果]通过核磁、红外及紫外证实己二胺相关结构及儿茶酚结构接入到了柠檬酸和聚乙二醇的主链上,己二胺改性成功。搭接剪切强度试验中,在氯化铁溶液与粘接预聚物溶液的体积比为1:2时,Fe3+交联的DAH-iCMBAs搭接剪切强度最大;PI交联的DAH-iCMBAs和Fe3+交联的DAH-iCMBAs二者间的搭接剪切强度的大小无统计学差异,均远远优于SN交联的DAH-iCMBAs及纤维蛋白胶,而SN交联的DAH-iCMBAs略优于纤维蛋白胶,两者差异无统计学意义。细胞毒性实验中,iCMBAs预聚物和DAH-iCMBAs预聚物在稀释10倍后,NIH/3T3的细胞活性达到85%以上,iCMBAs预聚物对于NIH/3T3的细胞活性影响稍小于DAH-iCMBAs预聚物;DAH-iCMBAs聚合物析出物溶液和降解溶液的细胞毒性,在稀释10倍后,NIH/3T3的细胞活性达到70%以上。此外,在荧光显微镜下观察显示DAH-iCMBAs聚合物析出物溶液稀释10倍后,细胞随培养时间的延长在不断增殖,和对照组相比,DAH-iCMBAs聚合物析出物溶液几乎不干扰细胞增殖速率。[结论]不同交联剂对贻贝仿生组织粘接剂粘接性能的影响:PI、Fe3+交联的预聚物搭接剪切强度高,而通过SN交联的预聚物强度则仅稍强于纤维蛋白胶,故PI、Fe3+促交联的效果好;不同交联剂在适宜浓度下均不会干扰DAH-iCMBAs预聚物的细胞增殖活性;随着时间的延长,适宜浓度交联的DAH-iCMBAs在一定的时间内不会影响细胞的增殖速率,可为进一步的实验提供理论基础。
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