[目的]严重内毒素血症极易并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS),死亡率高。内毒素耐受是预先注射小剂量或亚致死量LPS后,机体对大剂量或致死量LPS呈低反应甚至无反应的现象。但其机制目前尚不清楚。本实验通过建立内毒素耐受大鼠和内毒素血症肺部炎症反应模型,比较内毒素耐受和正常对照大鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)和肺脏组织中的E—选择素(E—selectin)、P—选择素(P—Selectin)和血管细胞间黏附分子—1(VCAM—1)的动态变化,研究E、P—选择素和VCAM—1在内毒素耐受时,对大剂量LPS导致的微血管通透性升高、肺部PMN浸润和急性炎症反应削弱或抑制等相关病理生理改变中的作用。研究内毒素耐受和正常大鼠肺部NF-κB核转位和活化的变化以及亚单位构成,明确NF-κB在内毒素耐受中的分子调节机制。[方法](1)内毒素耐受和内毒素血症肺部炎症反应模型的建立:清洁级健康雄性SD大鼠,体重170～200克,共82只,随机分入内毒素耐受(ET)组和正常对照(NC)组。ET组0.6mg/kg/d(小剂量)腹腔注射LPS,连续4天建立内毒素耐受大鼠模型;NC组注射等量生理盐水。第五天腹腔注射6mg/kg LPS(大剂量)诱导全身以及肺部炎症反应。第一部分:各组按注射大剂量LPS前(0h),注射后1、2、6、24h分为5组,n=5。在各时间点腹主动脉采血,立即进行外周血白细胞计数和分类;左侧肺灌洗取BALF立即进行白细胞计数和沉渣白细胞分类:右侧肺组织分别迅速置入4%甲醛和液氮。将血清、BALF上清和速冻后的肺组织于-80℃保存待侧。第二部分:各组按注射大剂量LPS前(0h),注射后2、6、24、48、72h分为6组,n=6。在各时间点取右侧肺组织分别迅速置入4%甲醛和液氮。速冻后的肺组织于-80℃保存待侧。(2)采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清、BALF和肺组织匀浆E—Selectin、P—selectin和VCAM—1。(3)电泳迁移率变动分析(EMSA)测定肺部NF-κB核转位和活化的变化以及亚单位构成。(4)统计学分析:采用SPSS10.0医学统计软件,变量以平均数±标准差(SD)表示,组间比较采用t检验,组内比较采用Dunnett’s方差分析。[结果](1)在1h时血清中E-selectin不论在ET组抑或NC组均有明显的上升,但两组间无显著性差异(70.31±10.67pg/mL Vs 54.95±13.10 pg/mL,p>0.05),2 h ET组和NC组出现明显的E—selectin下降,而且2h、6h、24h三个时间点两组的E—selectin趋向稳定,与在LPS刺激前表达水平相当。(2)ET组的BALF中酌E—selectin表达变化与血液中E—selectin明显不同。NC组在接受大剂量LPS后1h即出现明显的E—selectin表达的升高,显著高于接受大剂量LPS前(89.72±16.66 pg/mL Vs40.95±15.80 pg/mL,p<0.01),之后在2h和6h明显下降,但高于接受LPS前,到