在世界范围内,牛支原体已经成为牛场的一种最为主要的病原。它可以引起黄牛和奶牛等肺炎、关节炎、乳房炎和结膜炎等一系列的病理症状,并且在引起病理变化的过程中伴随着其它的病原感染。自1961年世界首次在美国一头患有乳房炎的病牛分离到牛支原体以来,随着世界范围内的牲畜运输,病原已经传播和扩散到世界的各个地区。这就导致了牛支原体病在世界各个国家的广泛流传,造成了巨大的经济损失,极大的影响和危害了畜牧养殖业的健康发展。2008年以来,湖北省自外地外地引进肉牛中,陆续出现了以呼吸道病症为主的疑似“牛肺疫”的疫情报道。本课题主要从以下三个方面进行了研究：我国肉牛牛支原体肺炎的病原鉴定；GAPDH基因的克隆表达、间接ELISA方法的建立与牛支原体肺炎血清学调查；牛支原体灭活疫苗的研究。具体研究内容如下：1.我国肉牛牛支原体肺炎的病原鉴定2008年以来,湖北省自外地外地引进肉牛中,陆续出现了以呼吸道病症为主的疑似“牛肺疫”的疫情报道,通过分离和培养病原,在显微镜下观察细菌菌落,成功观察到了典型的“煎蛋样”菌落,并把16S rRNA扩增后测序结果在Genebank比对,与牛支原体16S rRNA序列比对结果为99%,随后进行了人工感染易感动物,成功观察到类似的症状,分离到相同的病原。结合上述实验结果,本课题成功的鉴定了病原为牛支原体,并把该次疫情命名为牛支原体肺炎,首次公开报道了牛支原体疫情在国内的流行情况。2.GAPDH蛋白的克隆表达、间接ELISA方法的建立与牛支原体肺炎血清学调查国外的很多文献报道牛支原体GAPDH基因具有具有极大的价值用于鉴别诊断牛支原体肺炎的病原,但国内尚未有牛支原体GAPDH克隆表达及用于临场诊断等相关研究报道,可以说GAPDH在国内的研究和应用仍属空白。本课题的主要目的就是利用基因工程手段克隆表达GAPDH蛋白,然后利用该蛋白作为抗原建立了间接ELISA检测方法,并在临床上用于血清学诊断。检测临床表现健康牛畜血清样本41份和发病牛畜血清样本57份。其中发病样本的阳性检出率78.97%,阴性检出率8.77%,可疑12.28%,这个结果与采集发病样本的牛场实际情况大致相符,说明GAPDH蛋白作为检测方法可靠性比较高,并且原理简单、方法简便,操作周期短,比较适合作为一种快速的方法用于牛支原体肺炎的临床样本的检测。3.牛支原体灭活疫苗的研究3月龄犊牛39头,随机将其中36头分为3组作为免疫组,每组12头,余下的3头牛作为空白组,采用不同佐剂的灭活疫苗进行3次免疫后进行攻菌,通过比较各组的临床症状、抗体消长水平、体重的增长情况等因素,综合各项指标比较后,得出ISCOM作为佐剂免疫牛畜能够有效的刺激机体产生较高水平的抗体,减弱实验动物的临床症状,避免机体较大范围的体重锐减,这说明免疫刺激复合物可以做为.一种有效的牛支原体肺炎灭活疫苗的佐剂,用于深入研究和临床进一步实践。