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目的:本文主要研究肺腺癌间质中被α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)染色的肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)与肿瘤间质中微血管密度(MVD)、淋巴管密度(LVD)的关系,及CAFs对肺腺癌患者总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的影响。 方法:本研究共选择125例肺腺癌标本作为研究对象,均来自于2010年1月1日到2011年6月31日于青岛市市立医院胸外科行肺切除术的患者,所有患者术前未经辅助治疗,且术后均有明确的病理学诊断。操作中标本破坏3例,失访及随访信息缺乏病人29例,最终实际入选93例,其中男性为60例,女性为33例。按照国际抗癌联盟(UICC)制定的肿瘤分期标准将93例患者进行TNM分期,I期27例,Ⅱ期35例,Ⅲ期31例。以α-SMA标记CAFs,D2-40标记LVD,CD34标记MVD。所选病例的组织切片分别进行鼠抗人α-SMA单克隆抗体、鼠抗人原始造血细胞(CD34)单克隆抗体、鼠抗人D2-40单克隆抗体的免疫组织化学法染色。首先两名病理科医师采用双盲法分别计数,出现两名医师所得结果不一致时,请第三名病理科主任医师重新计数。将CAFs样本按其密度分为CAFs富集组和CAFs缺乏组,随机选取5张染色后的切片,每张切片于镜下随机选取5个400倍视野进行拍照,分别计数样本中阳性细胞个数及间质细胞个数,α-SMA+细胞个数占总间质细胞个数的百分比称阳性率,阳性率大于等于40%定义为CAFs富集组,即CAFs密集分布在肿瘤上皮组织且与肺腺癌组织无明显边界;小于40%定义为CAFs缺乏组,即CAFs分散在整个肿瘤区域。对于微血管的要求定义为细胞胞质或胞膜染色后呈现的黄色细颗粒,且与周边环境内肿瘤细胞及结缔组织成分有明显分界,即为阳性表达。定位明确、染色明显,有平均10个以上细胞染色的组织切片视为阳性,而染色弱或未成功染色者为阴性。对于淋巴管的要求定义为由内皮细胞形成腔隙状、条状等单独或成簇状的棕黄染色管腔,且与周边其他组织存在有较为明确界限的,即为淋巴管。通过D2—40阳性着色的单个或成簇内皮细胞计数为1个淋巴管,管腔<8个红细胞大小按1条淋巴管计数。以上两者分别确定3个最密集的着色区域,并通过高倍镜视野进行计数从而使评估更精确,计数结果取3个视野的均值来确定LVD、MVD值,分辨不清或颜色模糊的细胞不计数。相差10%以上重新计数。在本研究中对所选取的所有93例术后患者进行规范的密切的跟随访查,所有病人随访至死亡或疾病进展并使用统计学方法来评估其生存率。本研究中全部数据采用SPSS20.0软件进行数据处理,应用卡方检验、Logistic回归统计分析临床病理参数与免疫组化染色结果间的相关性,Kaplan-Meier法、Cox比例风险模型分别用于进行单因素、多因素生存分析,通过Log-rank检验来比较生存率差异。P<0.05为差异有统计学意义。 结果:α-SMA的表达主要定位于细胞浆和细胞膜内,以50%作为分界点,93例肺腺癌患者中CAFs丰富组即α-SMA高表达组为72例,CAFs贫乏组即α-SMA低表达组为21例;肺腺癌间质内α-SMA、MVD、LVD的表达与肺腺癌患者的年龄、肿瘤大小、分化程度、临床分期及是否有转移明显相关,差异有统计学意义(P<0.05);与肺腺癌患者的性别、肿瘤部位、吸烟史均无明显相关,差异无统计学意义(P>0.05);肺腺癌患者间质内α-SMA高表达组的MVD、LVD相比较于间质内α-SMA低表达组的MVD高,LVD与MVD之间存在相关性,此差异存在统计学意义(P<0.05)。肺腺癌患者中,CAFs缺乏组的3年生存率为64.5%,大大高于CAFs富集组(41.9%);年龄、临床分期、α-SMA、CD34、D2-40、肿瘤直径、分化程度、淋巴结是否转移对肺腺癌患者OS有影响,差异有统计学意义(P<0.05);而性别、吸烟史、肿瘤部位对其OS影响不大(P>0.05)。Cox多因素生存分析结果示:临床分期为OS的独立预后因素,其差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:本研究表明肺腺癌间质中CAFs、LVD、MVD三者之间相互影响,且与肺腺癌患者的预后呈明显负相关。肺腺癌间质内的CAFs是肺腺癌患者不良预后的重要影响因素,在肺腺癌的发生、发展及转移等方面起到了重要作用。