辣椒素对脉络膜黑色素瘤C918和OCM-1细胞株增殖、迁移和自噬的影响

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jerryfong
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目的:探讨辣椒素对脉络膜黑色素瘤C918和OCM-1细胞株增殖、迁移和自噬的影响,初步研究其相关机制。方法:通过CCK8实验和平板克隆实验检测100μmol/L、200μmol/L和300μmol/L三种浓度辣椒素对C918和OCM1细胞增殖能力的影响。通过细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验以及细胞间质标志物蛋白Vimentin、N-cadherin的表达来检测三种浓度辣椒素对C918和OCM1细胞迁移能力的影响。通过自噬标志物LC3-Ⅱ蛋白的表达来检测三种浓度辣椒素对C918和OCM1细胞自噬的影响。通过p-AMPK和p-mTOR蛋白的表达检测三种浓度辣椒素对C918和OCM1细胞AMPK/mTOR信号通路的影响。实验组为含100μmol/L、200μmol/L和300μmol/L辣椒素培养基处理的C918和OCM1细胞,对照组是不含辣椒素培养基处理的C918和OCM1细胞,所有实验均重复三次,统计学方法采用t检验。结果:1)CCK-8实验显示三种浓度辣椒素均能降低C918细胞存活率(P<0.0001),只有300μmol/L辣椒素能降低OCM-1细胞存活率(P<0.01);平板克隆实验显示三种浓度辣椒素100μmol/L、200μmol/L和300μmol/L均能降低C918细胞的细胞克隆数(P<0.05;P<0.001;P<0.0001)。三种浓度辣椒素100μmol/L、200μmol/L和300μmol/L均能降低OCM-1细胞克隆数(P<0.001;P<0.0001;P<0.0001)。2)细胞划痕实验显示200μmol/L和300μmol/L辣椒素处理C918细胞24小时后,C918细胞水平迁移率降低(P<0.001;P<0.0001);200μmol/L和300μmol/L辣椒素处理OCM-1细胞48小时后,OCM-1细胞水平迁移率降低(P<0.05;P<0.0001);300μmol/L辣椒素处理OCM-1细胞96小时后,OCM-1细胞水平迁移率降低(P<0.0001)。Transwell细胞迁移实验显示三种浓度辣椒素均能降低C918和OCM-1细胞的穿膜数量(P<0.0001)。Western blot实验显示300μmol/L辣椒素处理组C918细胞内Vimentin蛋白的表达降低(P<0.01),200μmol/L和300μmol/L辣椒素处理组C918细胞内N-cadherin蛋白的表达降低(P<0.05;P<0.01);200μmol/L和300μmol/L辣椒素处理组OCM-1细胞内Vimentin蛋白的表达降低(P<0.05;P<0.0001),300μmol/L辣椒素处理组细胞内N-cadherin蛋白的表达降低(P<0.05)。3)Western blot实验显示200μmol/L和300μmol/L辣椒素处理组C918细胞内LC3-Ⅱ蛋白的表达增加(P<0.05;P<0.05);100μmol/L、200μmol/L和300μmol/L辣椒素处理组OCM-1细胞内LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加(P<0.05;P<0.01;P<0.01)。4)Western blot实验显示300μmol/L辣椒素处理组C918细胞内p-AMPK蛋白的表达增加(P<0.001),200μmol/L和300μmol/L辣椒素处理组C918细胞内p-mTOR蛋白的表达降低(P<0.05;P<0.05);100μmol/L、200μmol/L和300μmol/L辣椒素处理组OCM-1细胞内p-AMPK蛋白的表达增加(P<0.05;P<0.01;P<0.01),三种辣椒素处理组OCM-1细胞内p-mTOR蛋白的表达均降低(P<0.0001)。结论:辣椒素对C918和OCM-1细胞的增殖能力有抑制作用;辣椒素对C918和OCM-1细胞的迁移能力有抑制作用;辣椒素能够促进C918和OCM-1细胞发生自噬;辣椒素可能通过调控AMPK/mTOR信号通路参与了其对C918和OCM-1细胞的增殖、迁移、自噬的影响。
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