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目的:确立毛橘红中野漆树苷的提取纯化工艺,并研究野漆树苷的肠道吸收特点及其在大鼠血液、组织中的药物代谢动力学特征,以期探索野漆树苷的体内吸收、分布过程,为该化合物及毛橘红总黄酮的深入研究提供实验依据,从而促进毛橘红资源的开发利用。方法:1.采用渗漉法结合重结晶法提取纯化野漆树苷,并用TLC、IR、LC-MS/MS、UV等方法对所制备的野漆树苷样品进行鉴别,UPLC法检测其纯度。2.应用UPLC-UV法测定大鼠肠灌流液中野漆树苷的浓度。ACQUITY BEH C18色谱柱(3.0mm×100mm,1.7μm);流动相为甲醇(A):0.5%乙酸水溶液(B)(48:52);流速为0.3ml/min;柱温为30℃;检测波长:337nm;进样体积2uL。3.利用在体单向肠灌流模型,研究野漆树苷溶液在大鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收,并考察不同质量浓度对十二指肠上端至空肠下端吸收的影响。4.用溶剂沉淀蛋白法预处理血浆样品后,利用UPLC-UV法测定大鼠血浆中野漆树苷的浓度。ACQUITY BEHC18 色谱柱(3.0mm×100mm,1.7um);流动相为甲醇(A):0.5%乙酸水溶液(B),梯度洗脱;梯度洗脱:0～2min,48%A～75%A;2～4min,75%A～48%A;4～5min,48%A～48%A,流速为0.3ml/min;柱温为30℃;检测波长:337nm;进样体积2uL。内标物为木犀草素。5.对大鼠静脉注射低、中、高三组剂量(20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg)野漆树苷,分别于给药 2min、5min、10min、15min、30min、45min、60min、75min、90min和120min后从大鼠眼底静脉丛取血0.5mL,按血浆预处理方法处理后,用建立的UPLC法测定不同取样点血浆中野漆树苷的浓度,并根据所得的血药浓度-时间曲线,分析其药物动力学参数。6.用溶剂蛋白沉淀法预处理组织样品后,采用UPLC-UV法测定大鼠组织样品中野漆树苷的浓度。ACQUITY BEH(C18色谱柱(3.0mm×100mm,1.7u m);流动相为甲醇(A):0.5%乙酸水溶液(B),梯度洗脱;梯度洗脱:1～3min,35%A～75%A;3～4min,75%A～750%A;4～6min,75%～35%;流速为0.3ml/min;柱温为30℃;检测波长:337nm;进样体积2uL。内标物为木犀草素。7.通过大鼠静脉注射给药(40mg/kg),于给药后10min、30min及60min3个时间点(分别代表分布,平衡,消除相)将大鼠拉断脊椎处死,每个时间点一组,每组6只,雌雄各半。处死后立即解剖,分别取出心、肝、脾、肺,肾、胃、肠共7种组织制备组织匀浆,并用建立的UPLC法测定不同取样点组织匀浆中野漆树苷的浓度。结果:1.野漆树苷的提取纯化制备所得野漆树苷单体运用薄层色谱鉴别,结果显示,其与野漆树苷标准品相比具有相同的比移值Rf=0.50;所得野漆树苷单体红外分析,与标准品的红外光谱一致;质谱测得分子量为578.09;综合分析,鉴定样品为野漆树苷。在不同色谱条件下(ACQUITY BEH C18 色谱柱(3.0mm×100mm,1.7um);流动相:甲醇:水(45:55)、乙腈-水(30:70)、甲醇:乙腈:0.5%乙酸水(30:10:60);流速为0.3ml/min;柱温为30℃;检测波长:337nm、283nm、267nm;进样体积2uL)采用UPLC测定野漆树苷,经面积归一化法计算,其纯度≥98%,可作为定性定量对照品使用,同时纯度满足药动学研究的要求。2.灌流液中野漆树苷浓度测定方法的建立实验表明,灌流液中的内源性物质不干扰野漆树苷的测定。同时,经方法学确认,野漆树苷在2～24ug/mL的浓度范围,线性关系良好,相关系数R2=0.9999;日内精密度RSD在0.40%～0.60%范围之内,日间精密度RSD在0.25%～1.07%范围内;方法回收率在96.11%～104.91%之间。由此表明,本方法适用于野漆树苷大鼠在体肠吸收的研究。3.在体单向肠灌流实验研究研究结果表明,各肠段的表观吸收系数(Papp)均大于0.2×10-4cm/s,表明野漆树苷在整个肠段吸收良好,其中十二指肠的Papp与表观吸收速率(Ka)最高,与其他肠段相比具有显著差异,说明十二指肠是野漆树苷的主要吸收部位。通过考察不同浓度野漆树苷对吸收的影响,发现不同浓度之间的Ka是趋于平衡的,并无显著性差异(P>0.05),且Papp随着药物浓度增加而增大,野漆树苷的吸收机制可能为被动扩散。4.血浆中野漆树苷UPLC测定方法的建立在该色谱条件下,血浆中的内源性物质不干扰野漆树苷样品的测定,并经方法学确认,野漆树苷在0.1～100.0ug/mL浓度范围内呈线性,相关系数R2=0.9997;日内精密度RSD在0.01%～1.53%范围之内,日间精密度RSD在0.44%～1.32%范围内;提取回收率在81.9%～85.7%之间。表明本方法适用于野漆树苷在大鼠体内的药物动力学研究。5.大鼠体内血浆药动学研究实验结果显示,野漆树苷在SD大鼠的体内过程符合二室模型,T1/2α分别为3.62、3.76 及 3.71 min;T1/2β分别为 17.00、21.66 及 23、70 min。K12分别为 0.081、0.077和 0.080 min-1;K21 分别为 0.059、0.044 和 0.042 min-1;AUC(0-t)分别为 590.36、1362.91及1823.49。药动学参数显示,野漆树苷在大鼠体内的吸收、分布、消除较快,静脉注射野漆树苷2min后体内浓度达到高峰,且血药浓度随时间成一级动力学消除,120min后,血浆中药物浓度基本检测不到。6.组织样品中野漆树苷UPLC测定方法的建立在该色谱条件下,各组织中的内源性物质不干扰野漆树苷样品的测定,且经方法学确认,野漆树苷在各组织样品的浓度范围内,均呈良好的线性,相关系数R2≥0.9993;日内精密度RSD在0.06%～0.36%范围之内,日间精密度RSD在0.58%～2.01%范围内;提取回收率在86.11%～91.49%之间,相对回收率在98.79%～101.69%之间;整体分析时间为6min,说明本方法适用于野漆树苷在大鼠体内的组织分布研究。7.野漆树苷在大鼠体内的组织分布研究实验表明,野漆树苷在大鼠体内分布广泛,各组织器官均有分布,其中以肝脏、肾脏分布最高,其次为肠、肺、胃,而脾、心的药物浓度分布较低。结论:建立的生物样品中野漆树苷UPLC测定方法,灵敏度高、精密度好、回收率高,适用于野漆树苷在大鼠体内的药物动力学相关研究。同时,野漆树苷在整个肠段吸收良好,其中十二直肠为主要吸收部分,吸收机制可能为被动扩散。野漆树苷在大鼠体内过程符合二室模型分布,并以一级动力学方式消除,在体内分布和消除均相对较快。此外,野漆树苷在大鼠体内主要分布在肝脏、肾脏,其次为肠、肺、胃,其中脾、心的药物浓度分布较低。