ATF6腺病毒的构建及对软骨细胞凋亡的研究

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xianglikai
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目的构建携人ATF6基因的重组腺病毒Ad-ATF6和siATF6,并探讨其对软骨细胞凋亡的影响。为进一步研究ATF6基因的生物学功能奠定基础,为与ERS相关的软骨发育疾病提供一定的参考价值。方法利用AdEasy TM腺病毒载体系统,构建重组腺病毒Ad-ATF6和siATF6,RT-PCR和Western blot在软骨细胞ATDC5中检测感染效果。Ad-ATF6分别感染软骨细胞ATDC5和C28I2,FCM检测细胞的增殖和凋亡;siATF6感染经TM处理的SW1353细胞,FCM、MTT和Westernblot检测ERS时细胞的凋亡情况;BMP2诱导ATDC5和C3H10T1/2细胞分化过程中,用Ad-ATF6和siATF6感染细胞,FCM、免疫组化、TUNEL和Western blot等检测软骨细胞分化过程中的凋亡情况。结果成功获得高滴度的重组腺病毒Ad-ATF6和siATF6;Ad-ATF6处理组的ATDC5细胞和C28I2细胞凋亡率明显增加(P<0.05)、增殖率明显降低(P<0.05);TM+siATF6处理组SW1353细胞凋亡率明显高于TM+Ad-ATF6处理组(P<0.05);BMP2诱导ATDC5和C3H10T1/2细胞及骨组织分化过程中,Ad-ATF6处理组凋亡明显高于siATF6处理组(P<0.05)。结论非ERS状态下,过量的ATF6会诱导软骨细胞的凋亡,抑制其增殖;ERS状态下,ATF6能够帮助细胞恢复正常状态,抑制细胞的凋亡,促进其增殖;BMP2诱导软骨分化过程中,ATF6能够促进内质网应激介导的凋亡。
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