红芪总多糖抗肿瘤和抗衰老活性的实验研究

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目的:研究红芪总多糖(Total Hedysari Polysaccharide,THPS)抗肿瘤和抗衰老的作用,探讨其作用机制。 方法:1、水提醇沉法从多序岩黄芪中提取THPS并测定其分子量、纯度、糖及糖醛酸含量、单糖组成。2、90只昆明小鼠随机分为9组,第1组作为Normal control,每天给予生理盐水10mL·kg-1腹腔注射,后8组接种S180瘤后再重新随机分为8组,S180control组,每天给予生理盐水10mL·kg-1腹腔注射,环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)组给予CTX20mg·kg-1隔天腹腔注射,THPS100、THPS200和THPS400组分别每天给予THPS100mg·kg-1,200mg·kg-1和400mg·kg-1腹腔注射,THPS100+CTX、THPS200+CTX和HPS400+CTX组分别每天给予THPS100 mg·kg-1、200 mg·kg-1和400 mg·kg-1及隔天CTX20mg·kg-1腹腔注射,14天后处死小鼠。3、测定每组小鼠的瘤重、抑瘤率、动态瘤体大小变化、红细胞、血红蛋白、白细胞、血小板、胸腺指数和脾指数,流式细胞仪检测NK细胞、CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞数量及CD4+/CDs+比值,ELISA法测定每组小鼠外周血白介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,免疫组化测定每组肿瘤组织核转录因子κB(NF-κB)含量。4、昆明小鼠50只接种S180瘤后随机分为5组:Normal control组,每天给予生理盐水10mL·kg-1腹腔注射,CTX组,CTX20mg·kg-1隔天腹腔注射,THPS低剂量、THPS中剂量和THPS高剂量组分别每天给予THPS100mg·kg-1、200 mg·kg-1和400mg·kg-1腹腔注射,14天后处死小鼠。5、电镜观察各组瘤细胞的形态,激光共聚焦(LSCM)测定每组瘤细胞DNA、RNA含量、细胞内钙离子浓度、自由基含量及线粒体膜电位。6、72只Wistar大鼠随机分为6组,分别为Normal control、Aging control、THPS50、THPS100、THPS200和THPS400组,分别给予Normal control和Aging control组每天生理盐水10mL·kg-1腹腔注射,THPS的四个剂量组分别每天给予50mg·kg-1,100mg·kg-1,200mg·kg-1,400mg·kg-1mg的THPS腹腔注射,自由进食水,56天后处死动物。7、检测血清和肝脏匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)含量,检测THPS对超氧阴离子(O2-)和羟基自由基(·OH)的清除能力。 结果:1、200 mg·kg-1的THPS对小鼠S180瘤有一定的抑制作用(27.81%)且与CTX合用后有良好的协同作用(79.82%),增高荷瘤及CTX所治疗小鼠的胸腺、脾脏指数、CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、TNF-α和NF-κB的含量作用。2、200 mg·kg-1的THPS可明显升高细胞内钙离子浓度、自由基含量,降低线粒体膜电位和瘤细胞DNA、RNA含量的作用。3、200 mg·kg-1和400mg·kg-1的THPS能清除O2-和-OH,降低血清肝脏匀浆中MDA含量,增加血清和肝脏匀浆中SOD和GSH-PX的作用,以400mg·kg-1的THPS的效果最好,具有剂量的依耐性。 结论:1、200 mg·kg-1的THPS通过增高荷瘤及环磷酰胺所治疗小鼠的胸腺、脾脏指数、CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、TNF-α和NF-κB的含量,上调小鼠免疫功能而发挥抑制S180瘤生长和减轻CTX所致的免疫抑制作用,该剂量的THPS与CTX合用有良好的协同作用。2、200 mg·kg-1的THPS通过升高瘤细胞内钙离子浓度、自由基含量及降低线粒体膜电位而诱导小鼠S180瘤细胞凋亡。3、THPS通过清除O2-和·OH含量,降低血清和肝脏匀浆中MDA含量,增加血清和肝脏匀浆中SOD和GSH-PX的作用而发挥抗衰老作用。
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