桧烯因具有高能量密度和高燃烧热的特点,有望成为下一代重要生物燃料。本研究在酿酒酵母中构建了桧烯的合成路径,通过关键酶N端截短和蛋白融合、产物外排强化和前体牻牛儿基焦磷酸（GPP）供应调节策略,实现了桧烯在酿酒酵母中的高水平合成。本研究通过在酿酒酵母中表达法呢基焦磷酸合成酶（ERG20）的突变体ERG20^ww和Salvia pomifera来源的桧烯合酶（Sp＿Sab S1）构建了桧烯的合成路径。通过截短Sp＿Sab S1 N端前34位氨基酸残基（Sp＿t34Sab S1）,使桧烯产量较初始产量（0.44 mg/L）提高3.95倍。在多表达一拷贝ERG20^ww的基础上,通过ERG20^ww与Sp＿t34Sab S1的正向蛋白融合,使桧烯产量进一步提高96.86%。在表达截短桧烯合酶Sp＿t34Sab S1的基础上,筛选和表达2种不同来源的外排蛋白以加强桧烯的外排,从而减轻桧烯毒性对细胞的影响。来自子囊菌（Grosmannia clavigera）的外排蛋白Gc＿ABCG1效果最好,使桧烯产量提高1.04倍,达到4.57 mg/L。为了降低GPP的胞内消耗使更多GPP流向桧烯合成路径,通过启动子替换下调内源基因ERG20的表达,使得桧烯产量提高1.06倍。同时,为了充分利用前体GPP,在胞质与细胞器间进行了Sp＿t34Sab S1的定位表达。通过在胞质与过氧化物酶体、线粒体与过氧化物酶体、胞质与线粒体协同表达Sp＿t34Sab S1分别使桧烯产量较仅胞质表达提高36.74%、40.81%和153%,其中Sp＿t34Sab S1在胞质与线粒体的定位表达使得桧烯产量达64.55 mg/L,为目前酿酒酵母在摇瓶水平的桧烯最高产量。