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目的通过体外细胞实验探讨肌肉干细胞来源的条件培养基(MuSC-CM)对成纤维细胞的增殖、迁移及成纤维细胞向肌成纤维细胞分化功能的影响,同时通过动物实验探讨MuSC-CM对SD大鼠创面愈合的影响。方法取新西兰大白兔后肢比目鱼肌肌肉组织,采用差速贴壁培养法分离培养肌肉干细胞(MuSCs)并用细胞免疫荧光染色法进行初步鉴定,制备MuSC-CM并用超滤离心管浓缩。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定10倍浓度MuSC-CM中的生长因子含量。将成纤维细胞分为四个不同处理组,分别为5倍浓度MuSC-CM组(5倍CM),10倍浓度MuSC-CM组(10倍CM)和20倍浓度MuSC-CM组(20倍CM)以及无条件培养基组(N-CM)。通过CCK8实验和细胞划痕实验分别检测不同浓度的MuSC-CM对成纤维细胞增殖和迁移功能的影响,通过Western Blot和3D胶原回缩实验检测MuSC-CM对成纤维细胞向肌成纤维细胞分化功能的影响。制作SD大鼠背部皮肤全层伤口模型,将大鼠分为3个不同治疗组,分别为CM组(10倍CM),N-CM组和空白对照组,在各组大鼠创周6个不同方向分别注射以上溶液10μl。在术后即刻及14天观察伤口残余面积,比较伤口愈合速度。结果本实验成功分离肌肉干细胞,经desmin免疫荧光染色初步鉴定结果符合肌肉干细胞特征。10倍浓度MuSC-CM中,TGF-β1浓度相对较高,达到(6.38±0.57)ng/ml,IGF-1、PDGF-BB、VEGF、bFGF浓度分别为(2.74±0.32)ng/ml、(1.42±0.15)ng/ml、(2.19±0.32)ng/ml、(4.35±0.51)ng/ml。CCK8实验结果示,不同浓度实验组中成纤维细胞的增殖情况均显著高于N-CM组,且在48h和72h两个时刻MuSC-CM的促成纤维细胞增殖作用呈浓度依赖性趋势。细胞划痕实验结果显示,经过不同处理24h后,各MuSC-CM处理组的成纤维细胞迁移率均显著高于对照组(N-CM),差异有统计学意义,而且随着MuSC-CM浓度的增加,成纤维细胞迁移率显著升高。Western blot结果示,不同浓度MuSC-CM处理后肌成纤维细胞α-SMA蛋白表达量显著高于N-CM组,在3D胶原回缩实验中,24h后不同浓度MuSC-CM处理组的3D胶原回缩程度显著高于N-CM组,差异均有统计学意义。大鼠背部全层伤口术后14天,经过MuSC-CM注射的大鼠伤口面积为(7.47±1.92)%,显著高于N-CM组(14.83±3.61)%和空白对照组(14.15±2.87)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本实验初步证明MuSC可能通过旁分泌作用分泌多种生长因子增强成纤维细胞的增殖与迁移能力,同时促进成纤维细胞向肌成纤维细胞分化从而促进创面愈合。