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【目的】建立经济简便稳定的同步分离培养大鼠肝星状细胞(hepaticstellatecells,HSCs)与枯否细胞(kupffercells，KCs)方法，为研究肝星状细胞、枯否细胞生物学特性及肝纤维化(HF)的发生机制提供细胞学方法基础。【方法】采用链霉蛋白酶、Ⅳ型胶原酶离体灌流，10.387％与18.8％Nycodenz密度梯度高速(20000r/min)离心分离培养SD大鼠原代肝星状细胞、kupffer细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活率。通过结蛋白(desmin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫细胞化学SABC法鉴定HSCs。采用溶菌酶(lysozyme)免疫细胞化学法与印度墨汁吞噬功能实验鉴定KCs。【结果】成功同步分离培养大鼠HSCs、KCs，免疫细胞化学SABC法证实所分离的细胞分别为肝星状细胞和kupffer细胞，且kupffer细胞吞噬功能明显。每只大鼠的HSCs和KCs的细胞得率分别为2.0×107/肝和1.2×107/肝，平均纯度分别为93％、91％，活率分别为92％、94％。【结论】本实验同步分离培养大鼠肝KCs和HSCs的方法简便经济，细胞得率、活率和纯度高，能用于肝纤维化机制的研究。【目的】研究内毒素脂多糖(LPS)与其刺激的kupffer细胞(KCs)培养上清(KCCM)及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC，NF-kB通路抑制剂)对大鼠原代肝星状细胞(HSCs)表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响，探讨LPS刺激HSCs表达CTGF的机制。【方法】培养72h的KCs经1mg/LLPS刺激48h后收集上清标记为KCCM1，未经LPS刺激的上清标记为KCCM0。将培养72h的HSCs随机分为空白对照组、KCCM0组、LPS组、KCCM1组、PDTC组、PDTC＋LPS组、PDTC＋KCCM1组。各组HSCs经相应的处理48h后，westernblot检测各组HSCs表达CTGF水平，ELISA检测培养上清中Ⅰ型胶原含量。【结果】各组HSCs中CTGF含量为：空白对照组(1.95±0.67)、KCCM0(2.15±1.10）、LPS(4.56±4.16）、KCCM1(5.21±3.23）、PDTC(0.06±0.02）、PDTC＋LPS(0.10±0.08）、PDTC＋KCCM1(2.77±4.08）。与空白对照组相比，LPS与KCCM1作用于HSCs后CTGF表达增加(P＜0.05），PDTC与PDTC＋LPS处理的HSCs中CTGF表达明显下降(P＜0.01）。PDTC与KCCM1联合比单独KCCM1作用于HSCs的CTGF表达减少(P＜0.05）。ELISA结果显示，KCCM1组HSCs上清中Ⅰ型胶原的含量增加(P＜0.05）。【结论】LPS可直接通过HSCs内的NF-kB通路使其表达CTGF水平上调，LPS刺激的kupffer细胞还可能通过其它途经使HSCs表达CTGF水平上调。