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本研究从绿茶中分离提取EGCG,并进行在体和离体抗肿瘤实验,考察茶EGCG在体内外的抗肿瘤作用,寻找与EGCG抗肿瘤相关的特异蛋白,分析特异蛋白的结构和功能,对EGCG的抗肿瘤机制进行探讨。茶EGCG采用咖啡碱沉淀溶剂萃取法分离提取,对EGCG分离提取参数采用二次回归旋转组合实验设计进行优化,以EGCG的纯度为考察值,选取影响EGCG分离提取的水浸提温度、咖啡碱浓度以及氯仿、已酸乙酯和乙酸丙酯的萃取次数为自变量,建立数学模型,筛选最优分离提取条件。再选用癌细胞(小鼠肉瘤细胞株S180和人肝癌细胞株HUH-7)进行实验室培养,进行离体抗癌实验,将细胞株按不同浓度梯度用EGCG进行处理,采用MTT法检测肿瘤细胞的抑制率,考察EGCG在体外对癌细胞的作用。随后建立小鼠荷瘤模型(小鼠肉瘤S180和小鼠宫颈癌U14肿瘤模型),与阳性组(环磷酰胺组)和空白组对照考察EGCG的抗肿瘤效果。并对肿瘤组织进行病理组织学分析,与对照组比较,观察EGCG抗癌作用。还进行了肿瘤组织的总蛋白质抽提,对蛋白质采用双向电泳(2-DE)、质谱(MS)鉴定和生物信息学方法进行研究。咖啡碱沉淀溶剂萃取法是一种操作简便、成本低廉的实验室提取EGCG的方法,实验结果表明,提取最优参数组合为水浸提温度、咖啡碱浓度以及氯仿、已酸乙酯和乙酸丙酯的萃取次数分别为:80℃、30mmol/L、5、3和3,在此条件下从高EGCG绿茶中分离提取EGCG,经过进一步纯化得到的EGCG成品经高效液相色谱检测,纯度为98.7%。离体实验证明EGCG对人肝癌HUH-7细胞以及小鼠肉瘤S180细胞生长的均有明显抑制作用,最高抑制率(EGCG浓度为100μg/mL时)分别为54.88%和63.52%,都表现为浓度依赖性抑制肿瘤细胞的增殖,实验观察到EGCG对小鼠肉瘤S180细胞和对人肝癌HUH7细胞的生长没有明显差别。在体实验EGCG(60mg/kg.d×10d)对小鼠肉瘤S180和小鼠宫颈癌U14的抑制率为51.19%和45.78%,阳性组(环磷酰胺组)的抑制率分别为64.49%和58.42%,EGCG和环磷酰胺对这两种肿瘤的作用在统计学上没有显著差别。离体实验和在体实验都证明EGCG具有抗肿瘤作用,且毒副作用小,可以作为抗肿瘤药加以开发。与空白组对照,双向电泳(2-DE)在S180组有21个差异蛋白点(表达下调16个,上调5个),在U14组有20个差异蛋白点(表达下调13个,上调7个)。筛选其中差异最显著的10个蛋白点进行质谱(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定、串联质谱技术(MS/MS)分析与数据库检索,鉴定出其中8个蛋白质,分别是是:transferrin、parvalbumin、stress-induced phosphoprotein、Alpha-enolase、Heat shock 27kDa protein,Annexin A2、crystallin、ribosomal protein,还有两个未知蛋白质。认为EGCG抗肿瘤作用是通过与特异的蛋白质相结合,直接或间接地和靶蛋白质相互作用发挥其抗肿瘤效应,Annexin A2、Alpha-enolase、ribosomal protein很可能是EGCG抗肿瘤作用的靶蛋白,通过这些蛋白激发一系列的生理反应,多途径发挥抗肿瘤的作用。