论文部分内容阅读
彝族传统植物药“黄药”,系菊科艾纳香属植物艾纳香(Blumea balsamifera DC.)的干燥全草,其性苦寒,入脾、肺气路,有清热解毒、逐淤化痰之功效,为彝医学治疗肺癌的特色药物。在前期课题的基础上已证明“黄药”疗效,也发现了活性单体,但没有确定发挥作用的活性成分群。本文以活性成分理论为指导,利用代谢组学优势,采用成熟的体内外成分关联分析策略,运用LCMS-IT-TOF分析原药样品与给药组血清及代谢物样本间的成分差别,确定潜在的活性组分及代谢物,分析其抗癌活性成分。首先运用DNA条形码鉴定“黄药”真伪,然后将“黄药”二氯甲烷萃取部位进行有效成分的富集,选取分离出的部位Ⅶ进行小鼠灌胃。实验采用C57BL/6J小鼠,于右腋皮下注射Lewis肺癌细胞,将造模成功的荷瘤小鼠随机分成8组,每组13只,即模型组、部位Ⅶ高、中、低剂量组、花椒油素组、紫杉醇组,另设空白组和正常小鼠中剂量组。给药期间观察小鼠生存状况,监测小鼠肿瘤体积变化,于给药后两小时内接取小鼠粪便和尿液,第19天取材,摘眼球取血,常规法取肿瘤组织、脾、胸腺并称重,分别计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数。H-E染色法研究肿瘤组织病理变化,免疫组化(IHC-P)法检测VEGF和TNF-α蛋白的表达情况。运用LCMS-IT-TOF对小鼠血清和尿液、粪便成分进行对比分析,通过与“黄药”原药成分比对、相同母核骨架对照解析、数据库搜索及分子离子化特征、分子特征裂解碎片解析等手段鉴定活性成分群中单体结构。结果表明(1)各用药组瘤重均小于模型组(4.17±1.08)g,高剂量组、花椒油素组、紫杉醇组瘤重分别为(2.67±1.08)g、(3.27±1.26)g、(3.20±1.30)g,差异具有显著性(P<0.05),抑瘤率分别为35.93%、21.6%、23.34%;高剂量组、低剂量组、花椒油素组、紫杉醇组脾脏指数分别为(11.64±1.96)、(11.58±2.42)、(11.78±3.12)、(11.86±1.94)mg/g与模型组相比,脾脏指数差异具有显著性(P<0.05)。(2)免疫组化结果显示,与模型组相比,各用药组VEGF平均光密度均较低,具有显著性差异(P<0.05),高剂量组高于紫杉醇组,差异具有显著性(P<0.05)。高剂量组、花椒油素组、紫杉醇组与模型组相比,TNF-α平均光密度较低,且具有显著性差异(P<0.05)。(3)运用LCMS-IT-TOF鉴定出“黄药”二氯甲烷部位中的13个化合物,分别为二氢槲皮素-4’-甲醚(1);怪柳黄素(2);3,3’,4’,5-四羟基-7-甲氧基二氢黄酮(3);芹菜素(4);金圣草素或香叶木素(5);鼠李素(6);3,5,3’-三羟基-7,4’-二甲氧基黄酮(7);二氢槲皮素-7,4’-二甲醚(8);木犀草素-7-甲醚(9);Blumeaguaianone B(10);5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮(11);5-羟基-3,7,3’,4’-四甲氧基黄酮(12);5 α,8α-过氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(13),其代谢成分分析有待于进一步研究。本文在以往工作的基础上,基于代谢组学研究方法,发挥LCMS-IT-TOF技术优势,研究彝族“黄药”抗癌活性成分群及其代谢物,为以后用于肺癌治疗提供理论依据。