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细胞凋亡,或程序性细胞死亡,在生物发育和维持正常生理活动过程中起着十分重要的作用。细胞凋亡是一种高度有序的程序性死亡方式,经典的凋亡途径有两条:外源性即死亡受体途径和内源性即线粒体介导的途径。因此,激活细胞凋亡途径成为抗癌药物研究的新热点,目前已成为抑制恶性肿瘤增殖的一种治疗手段。青蒿素(Artemisinin,ARTE)是我国学者首次从菊科植物黄花蒿(Artemisiaannua)中提取的一种具有过氧桥结构的倍半萜内酯。青蒿琥酯(Artesunate,ART)是青蒿素衍生物中的一种,它们作为新型的一线抗疟疾药,已经被世界卫生组织(WorldHealthOrganization)定为安全的抗疟疾药物。近年来,越来越多的研究证明,AR工具有抑制多种肿瘤细胞生长和诱导其细胞凋亡的能力。虽然前人付出了很多努力研究青蒿琥酯的抗肿瘤机制,但是青蒿琥酯对人肺腺癌细胞的作用机制仍然不清楚。 本文在人肺腺癌细胞(ASTC-a-1和A549)中研究了ART诱导细胞凋亡的分子调控机制。本文的实验工作主要分为两个部分: 第一部分的实验工作是在肺腺癌细胞中,采用CCK-8细胞活性检测、共聚焦显微成像、流式细胞仪、WesternBlotting、和荧光底物检测技术在人肺腺癌细胞中检测了ART诱导细胞凋亡中caspases的活化情况。我们的实验结果表明:1)ART在两个细胞系中诱导极显著的caspase-3的活化,还有少量的在A549细胞系中caspase-8、9的活化;2)ART诱导AIF、Smac从线粒体释放并转位到细胞核;3)AIF在ART诱导的细胞凋亡中起主要作用,而caspase-3在ART诱导的细胞凋亡中只起部分作用;4)线粒体途径参与了ART诱导的细胞凋亡(线粒体膜电位的下降)。 第二部分的实验工作,我们主要研究了Bax和Bak在ART诱导的人肺腺癌(ASTC-a-1和A549)细胞凋亡中所起的作用。我们的实验结果表明:ART诱导了线粒体膜电位的下降、大量的caspase-3而不是caspase-8、9的活化及AIF而不是cytochromec从线粒体的释放;干扰AIF后能较大程度的抑制ART诱导的细胞凋亡,而caspase-8、9的抑制剂对其没有作用,caspase-3的抑制剂只能较少程度的抑制ART诱导的细胞凋亡,并且干扰AIF能完全抑制caspase-8、9的活化和明显抑制caspase-3的活化,这些结果表明caspase非依赖的AIF途径在ART诱导的细胞凋亡中起主要作用。 ART处理细胞后,显著的诱导了Bak而不是Bax的活化。首先,干扰Bak而不是干扰Bax后,显著地抑制了ART诱导的细胞死亡、线粒体膜电位的下降以及AIF的释放,这就表明ART诱导的细胞凋亡中优先活化了Bak而不是Bax。其次,ART诱导Mcl-1的表达量有下调,干扰Mcl-1后,只是稍有加强ART诱导的Bak的活化。但有趣的是,将Bim干扰之后能显著地抑制ART诱导的细胞活力的下降和Bak的活化,而将Puma干扰后对其没有影响,表明Bim在ART诱导的细胞凋亡中的重要作用。再次,在细胞线粒体上还有另一个结合Bak并抑制其活化的非BC1-2家族的蛋白:电压依赖性阴离子通道2,近年来也有报道证明它是结合Bak,使Bak保持非活化状态的重要蛋白。干扰VDAC2后,显著的增强了ART诱导的细胞活力的下降和Bak活化,证明VDAC2在ART诱导的细胞凋亡中也起了重要的作用。总之,我们的结果首次证明了ART诱导的ASTC-a-1和A549细胞凋亡主要是通过Bak而不是Bax介导的AIF依赖的内源性的凋亡途径,而且,在该凋亡途径过程是Bim和VDAC2而不是Puma起了重要的调控作用。这些结果都为将ART发展成用于治疗肺腺癌的治疗药物提供了重要的实验依据。