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背景近些年来,随着现代医疗技术的研究与发展,过继性免疫治疗(adoptive immun-otherapy,AIT)显示出越来越显著的治疗效果,嵌合抗原受体T细胞(chimeric anti-gen receptor T cell,CAR-T)为T淋巴细胞具有更好的增殖性和生命持久性,更强的靶向杀伤肿瘤的效果,且为修饰T淋巴细胞的靶向免疫治疗新策略,从而且赋予AIT更显著的治疗效果[1]。近些年来CD112R一直被公认为是一个免疫的潜在检测点,本研究拟设计CD112R-CD28这种共刺激抗原转换策略,将CD112R胞内的抑制信号转换为CD28激活信号,构建出慢病毒表达载体,修饰T淋巴细胞,从而进一步增强T细胞的免疫功能及效果。目的构建嵌合抗原受体CD112R-CD28慢病毒表达载体,然后将嵌合抗原受体基因表达的慢病毒包装,体外感染sub T1和Jurkat细胞,从而使CD112R-CD28在这两种细胞株中高效表达,成功为增强过继免疫治疗的抗肿瘤疗效提供理论基础[2]。方法以CD112R为靶点的重组慢病毒由CD112R(579 bp,含胞外区和跨膜区),CD28(123 bp)构成,通过PCR扩增及寡聚核苷酸化学合成等方法,将嵌合抗原受体CD112R-CD28目的基因成功合成,再将目的基因克隆入载体p LVX-IRES-Zs Green的Eco R I和Xba I位点,在进行双酶切和测序验证之后,与慢病毒包装包装质粒Gag/Po1、Rev、VSV-G共转染293 T细胞包装成慢病毒,慢病毒感染sub T1和Jurkat细胞,流式细胞术检测EGFP基因表达。结果CD112R和CD28片段,通过重叠PCR拼接成CD112R-CD28,目的基因CD112R-CD28和表达载体p LVX-IRES-Zs Green通过Xba I以及Eco R I双酶切后连接,经过双酶切和测序验证正确后,将目的基因CD112R-CD28克隆入慢病毒表达载体内,并且序列正确,将慢病毒成功包装,感染sub T1和Jurkat细胞,采用流式细胞术方法分析EGFP的绿色荧光表达的情况。结论成功构建嵌合抗原受体CD112R-CD28慢病毒表达载体,并成功包装慢病毒,感染sub T1和Jurkat细胞后,这两株细胞都能够高效的表达目的基因,为慢病毒介导的嵌合抗原受体修饰T淋巴细胞靶向治疗肿瘤的研究奠定了基础[3]。