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背景:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是最常见的肝原发性肿瘤,其发病率居全球常见恶性肿瘤的第5位,病死率居第3位。近年来,由于饮食及生活环境的改变,我国HCC的发病率呈现出明显的增长趋势,我国己成为全球HCC发病率最高的国家。目前,临床上对于肝细胞癌尚缺乏特异性的治疗手段,而手术、放、化疗等传统治疗方式的局限性、带来的副作用导致病人生存率低和生活质量下降,因此,明确HCC全面的病理过程和相应的分子机制,寻找和发现新的治疗策略或靶点已成为目前肿瘤医学研究的热点问题。HCC的进展是一个涉及多种基因表达和细胞因子活化的动态变化过程,其中BACH1基因表达及糖酵解途径的激活是导致HCC进展的关键因素之一,针对BACH1基因突变及糖酵解途径进行靶向调控可为抗HCC药物的研发提供新的方向。非编码RNA具有多种生物学功能,是一类具有重要应用价值的治疗及预后预测分子,其对HCC的调控作用受到越来越多的重视。课题前期研究表明,LncRNATRG-AS1在HCC细胞中显著高表达,通过生物信息学预测软件发现,LncRNATRG-AS1可与miR-4500靶向结合形成ceRNA调控网络,并且miR-4500可靶向作用BACH1,但LncRNA TRG-AS1与miR-4500是否通过形成ceRNA网络调控BACH1及糖酵解途径促进HCC进展尚未见文献报道。因此,进一步研究LncRNATRG-AS1与miRNA的ceRNA网络在HCC中的调控作用有望为HCC的诊治提供新思路。第一部分LncRNATRG-AS1及BACH1在HCC组织中的表达其临床意义目的:研究LncRNA TRG-AS1及BACH1在HCC及癌旁组织中的表达情况,及其与多种肿瘤指标和预后的相关性。方法:基于TCGA数据集通过公共数据库Gene Expression Profiling Interactive Analysis（GEPIA,GEPIA（Gene Expression Profiling Interactive Analysis）（cancer-pku.cn））分析 lncRNATRG-AS1 及 BACH1 在 HCC 及癌旁组织中的表达情况;绘制Kaplan-Meier生存曲线。结果:1.LncRNA TRG-AS1及BACH1在HCC组织中高表达。2.LncRNATRG-AS1与BACH1的表达在HCC中具有相关性。结论:本研究基于TCGA发现LncRNA TRG-AS1及BACH1在HCC组织中高表达,故选定LncRNATRG-AS1位候选基因,以深入研究LncRNATRG-AS1在HCC发生和发展过程中的作用。第二部分LncRNA TRG-AS1促进HCC细胞株增殖、转移、EMT过程及对糖酵解的影响目的:探讨LncRNATRG-AS1对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学功能及有氧糖酵解的影响及调控作用,为肝癌疾病的治疗提供新的思路与潜在靶点。方法:RT-qPCR检测LncRNATRG-AS1 在肝癌细胞株（HCCLM3,MHCC97-H,Huh-7,MHCC97-L和SK-HEP-1）及正常肝细胞株THLE-2中的表达。在肝癌细胞HCCLM3和Huh-7中转染sh-TRG-AS1#1/#2,克隆形成试验及EdU检测细胞增殖能力变化;Transwell检测细胞侵袭和转移能力变化;RT-qPCR、Western blotting及免疫荧光染色检测转移相关蛋白E-cadherin,N-cadherin表达变化;检测葡萄糖摄取量和乳酸产量;ELISA和RT-qPCR检测糖酵解过程中关键酶的活性和表达。结果:1.LncRNA TRG-AS1在肝癌细胞中表达显著增加。2.沉默LncRNATRG-AS1能够抑制肝癌细胞的增殖、转移、侵袭及EMT过程。3.沉默LncRNATRG-AS1能够抑制GLUTS从而抑制肝癌细胞的葡萄吸收。4.沉默LncRNATRG-AS1能够抑制LDHA活性及表达从而减少乳酸的生成。5.沉默LncRNA TRG-AS1能够增加三羧酸循环关键酶CS的活性及表达,从而促进肝癌细胞的氧化磷酸化。结论:LncRNATRG-AS1在肝癌细胞中发挥促癌基因的功能,并可影响糖酵解过程。第三部分LncRNATRG-AS1靶向miR-4500调控BACH1及糖酵解途径促进HCC发展的作用研究目的:揭示LncRNATRG-AS1与miR-4500 ceRNA调控网络在HCC发展中的作用-,从靶基因调控、信号通路、分子机制网络层面探讨LncRNATRG-AS1作为HCC早期诊断生物标志物的临床价值。方法:生物信息学分析进行靶基因预测。TRG-AS1、miR-4500和BTB结构域与CNC同源物1（BACH1）之间的相互作用通过RIP、RNA 下拉和荧光素酶报告分析得到证实。进一步在细胞水平研究miR-4500及BACH1对肝癌细胞增殖、转移、侵袭的影响。最终回复实验验证LncRNATRG-AS1调控靶向miR-4500调控BACH1促进HCC发展和糖酵解的作用研究。结果:1.在肝癌细胞中lncRNATRG-AS1可靶向结合miR-4500。2.miR-4500在肝癌细胞中明显下调,过表达miR-4500可抑制肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。3.BACH1 可由 TRG-AS1 和 miR-4500 调控。4.BACH1可能是HCC的肿瘤促进基因。5.lncRNATRG-AS1 通过靶向 miR-4500/BACH1 轴参与 HCC 的进展。6.lncRNATRG-AS1通过靶向miR-4500/BACH1轴调节GLUTS影响肝癌细胞的葡萄吸收。7.lncRNATRG-AS1通过靶向miR-4500/BACH1轴调节LDHA活性及表达从而影响乳酸的生成。8.lncRNA TRG-AS1通过靶向miR-4500/BACH1轴调节三羧酸循环关键酶CS的活性及表达从而影响肝癌细胞的氧化磷酸化。结论:TRG-AS1 作为 miR-4500 的分子海绵调节 BACH1。lncRNATRG-AS 1沉默的细胞中miR-4500沉默或BACH1过度表达可减低肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT进展及糖酵解。LncRNATRG-AS1靶向miR-4500调控BACH1及糖酵解途径促进HCC进展的作用。