碳酸饮料对去势大鼠颌骨骨折愈合的影响

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目的通过建立骨质疏松大鼠颌骨骨折动物模型,观察长期饮用碳酸饮料对SD大鼠颌骨骨折愈合过程的影响,从骨痂区组织形态学观察、骨密度和影像学表现,以及BMP-2和IL-1表达的情况,探讨碳酸饮料对去势大鼠颌骨骨折愈合的影响,为临床中长期饮用碳酸饮料对骨质疏松性颌骨骨折愈合提供了实验依据。方法3月龄雌性SD大鼠50只,随机分成去势组(40只)和假手术组(10只)。去势组通过手术摘除双侧卵巢的方法,假手术组仅切除卵巢周边同样大小的脂肪组织。2个月后,测两组骨密度,差异有统计学意义,证明造模成功。将去势组随机分为2组,实验组和对照组,实验组用碳酸饮料喂养,每只每次20ml,每天2次,对照组饮用纯净水,在碳酸饮料饲养的4w、8w、12w每组随机选取5只检测胫骨骨密度,12w时差异有统计学意义。然后,实验组与对照组制作左侧下颌骨骨折模型,用双面金刚砂片在下颌体后部做一垂直于下颌骨的切口(长3mm,宽1mm),不破坏下颌骨的连续性。在骨折后2w、4w、8w每组分别处死5只大鼠,截取左侧下颌骨。首先对样本进行X线观察和骨密度检测。然后将骨组织固定12-24h,再脱钙约60d,最后经过石蜡包埋,切片等操作,分别进行HE组织切片染色和免疫组化BMP-2、IL-1的染色。对切片进行图像的采集与分析,进行组织形态学观察。使用IPP5.0软件对BMP-2和IL-1表达的平均光密度值(MOD)以及骨组织形态计量学(骨小梁面积比和平均宽度)进行测量。采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果1去势手术后2个月,去势组胫骨骨密度明显低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.01)。2喂食碳酸饮料12周时,实验组大鼠胫骨骨密度(BMD)明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。3颌骨骨折后,2周、4周、8周两组间X线比较:2周时,实验组和对照组都可以看见下颌骨下颌升支处明显的骨折区域,两组均为低密度影像,骨痂不明显,观察两组无差异。4周时,对照组骨折线模糊,骨折区域密度增高;实验组骨折线仍然明显,骨折区域密度稍有增高,但不如对照组。8周时,对照组骨折线消失,骨痂基本充满骨折区域;实验组仍能看到模糊的骨折线,与对照组相比,骨折区域与周围组织界限清楚。4颌骨骨折后,2周、4周、8周时,实验组左侧下颌骨骨痂骨密度均低于对照组(P<0.01),差异有统计学意义。5 HE染色观察:2周时,两组新生的骨小梁排列紊乱,在骨小梁周围有成骨细胞,与对照组比较,实验组骨小梁较少。4周,对照组新生小梁骨不断增加,成骨细胞开始转化为骨细胞。实验组骨小梁也有所增多但不如对照组。8周,对照组骨小梁改建成熟,骨小梁粗大,排列一致。实验组骨小梁转化缓慢,仍然可见骨小梁变细,并且粗细不一,同时分布稀疏,见有断裂现象。6骨组织形态计量学:骨小梁面积比值和骨小梁平均宽度在骨折后2、4、8周各时间段内实验组均低于对照组(P<0.05)。实验组和对照组各组内骨折后2、4、8周骨小梁的面积比和骨小梁平均宽度的数值随时间的增加而增长。7骨痂组织中BMP-2检测结果:测量实验组和对照组BMP-2阳性表达的平均光密度值,在骨折后第2、4、6、8周实验组均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组在骨折后2周、4周、8周BMP-2的平均光密度值依次降低,差异有统计学意义(P<0.01)。8骨痂组织中IL-1检测结果:测量实验组和对照组IL-1阳性表达的平均光密度值,在骨折后第2、4、8周实验组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组在骨折后2周、4周、8周IL-1的平均光密度值依次降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论1本实验通过去势法成功建立大鼠骨质疏松模型。2实验发现长时间饮用碳酸饮料的实验组胫骨段骨密度低于对照组,说明碳酸饮料可以加重去势大鼠的骨质疏松。3碳酸饮料能影响骨折愈合过程中BMP-2和IL-1的合成和分泌,抑制BMP-2的表达和促进IL-1阳性表达。4实验证实长时间饮用碳酸饮料的去势大鼠颌骨骨折愈合情况较差,愈合所需时间较长。
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