临床常见的人疱疹病毒有单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、爱泼斯坦-马尔病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)和人类疱疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)等，由人疱疹病毒感染引起的发热、黄疸、肝脾肿大、脑炎或脑膜炎等，因症状和体征无特异性，其早期诊断和及时治疗需依赖于实验室的诊断。在本研究中，我们在人疱疹病毒的DNA多聚酶基因区设计引物和寡核苷酸探针，并将探针固定于经特定修饰的玻片上，制成基因芯片，最终建立了PCR-基因芯片技术快速并行检测HSV-1、HSV-2、VZV、EBV、CMV、HHV-6A和HHV-6B等多种人疱疹病毒，并对临床血、脑脊液标本进行检测，取得良好结果。本研究分为两部分：第一部分，常见人疱疹病毒PCR-基因芯片技术的建立：第二部分，常见人疱疹病毒PCR-基因芯片技术的临床应用研究。第一部分常见人疱疹病毒PCR-基因芯片技术的建立方法：以人疱疹病毒DNA多聚酶基因为靶序列，设计引物，用于同时扩增单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、爱泼斯坦-马尔病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)和人类疱疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)等多种人疱疹病毒；在各扩增序列内设计特异寡核苷酸探针，并将探针固定于经特定修饰的玻片上，制成基因芯片；标本经PCR扩增并CY5荧光标记后，与基因芯片进行杂交分型，洗脱后激光扫描读片。结果：7种人疱疹病毒经PCR扩增后产物为224-252bp(HSV-1、HSV-2各232 bp，VZV 224 bp，EBV 227bp，CMV 235bp，HHV-6A、HHV-6B各252bp)，与基因芯片上相应的探针位点杂交后可鉴别分型，无交叉杂交现象，且各相同探针位点的杂交信号强度无明显差异。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙肝病毒、新型隐球菌、白色念珠菌及人基因组DNA经PCR扩增及凝胶电泳后，均未见相应长度片段的条带，与芯片亦无杂交现象。将各标准病毒株的质粒经梯度稀释至10~0～10~7拷贝／μl后作为模板，进行PCR-基因芯片技术检测，其最低检出浓度为：10~1拷贝／μl。结论：建立的多重PCR-基因芯片技术，可同时扩增并鉴别分型7种人疱疹病毒，且特异敏感、快速简便，可望为临床早期、准确诊断人疱疹病毒的感染提供有效方法。第二部分常见人疱疹病毒PCR-基因芯片技术的临床应用研究方法：对132例临床拟诊为病毒感染患儿的血标本，以及61例拟诊为病毒性脑炎、脑膜炎患儿的脑脊液标本，进行PCR-基因芯片杂交检测，同时用TaqMan荧光定量PCR法分别检测标本中HSV-1、HSV-2、EBV和CMV；并将部分阳性标本经分子克隆后测序。对照组为35例正常健康体检儿童的外周血和30份非病毒感染的脑脊液标本(脑肿瘤8份，化脓性脑膜炎22份)。结果：1、在132例血标本中，共检出49例阳性标本，其中HSV-1 1例，HSV-2 1例，EBV 16例，CMV 22例、HHV-6A 1例，HHV-6B 3例，HSV-2／CMV混合感染1例，VZV／CMV 1例，EBV／CMV2例，EBV／HHV-6B 1例；2、在61例脑脊液标本中，共检出6例阳性标本，其中HSV-1 1例，HSV-2 2例，EBV 1例，HSV-2／CMV混合感染1例，EBV／HHV-6B 1例；3、与TaqMan荧光定量PCR法比较，PCR-基因芯片技术检测血、脑脊液标本中HSV-1、HSV-2、EBV和CMV等4种病毒的敏感度和特异度分别为96.2％和99.3％；PCR-基因芯片检测VZV、HHV-6A、HHV-6B阳性的7份标本，经分子克隆后测序，与基因库中相应病毒序列比较，其同源性均大于98％。35例正常健康儿童的血标本和30例非病毒感染的脑脊液标本7种人疱疹病毒DNA检测均为阴性。4、多数病例临床诊断或症状支持PCR-基因芯片检测结果，部分病因或诊断不明确的病例(如肝功能损害原因待查、黄疸原因待查等)，PCR-基因芯片技术则可为其病因的明确提供有效手段。结论：将PCR-基因芯片技术应用于临床血、脑脊液标本中常见人疱疹病毒的检测及基因分型，具有快速、特异、敏感的特点，可为临床早期、准确诊断人疱疹病毒的感染提供有效方法。