【摘 要】
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目的:本研究以氯化镉（Cd Cl2）为受试物,探讨镉对小鼠精母细胞（GC-2spd）细胞自噬和细胞凋亡的影响及其潜在作用机制。方法:采用0、5、10μM Cd Cl2处理GC-2 spd细胞,Hoechst 33342和MDC染色细胞检测自噬体和凋亡小体,Western blot检测内自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin-1、Atg5、Atg7、Atg13和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Ca
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目的:本研究以氯化镉（Cd Cl2）为受试物,探讨镉对小鼠精母细胞（GC-2spd）细胞自噬和细胞凋亡的影响及其潜在作用机制。方法:采用0、5、10μM Cd Cl2处理GC-2 spd细胞,Hoechst 33342和MDC染色细胞检测自噬体和凋亡小体,Western blot检测内自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin-1、Atg5、Atg7、Atg13和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-9、Cleaved Caspase-3的表达水平;在含/不含Cd Cl2（10μM）的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-MA（60μM）和凋亡抑制剂z VAD-fmk（50n M）处理GC-2 spd细胞24h,检测细胞凋亡与自噬水平,分析Cd Cl2诱导GC-2 spd细胞自噬与细胞凋亡的关系。在含/不含Cd Cl2（10μM）的细胞培养液中加入溶酶体抑制剂CQ（5μM）处理细胞24h,免疫荧光法检测自噬体与溶酶体融合情况,Western blot检测LC3、P62和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平。在含/不含Cd Cl2（10μM）的细胞培养液中JNK抑制剂SP600125（80n M）处理GC-2 spd细胞24h,Hoechst 33342和MDC染色细胞检测自噬体和凋亡小体,Western blot检测JNK/c-Jun信号通路蛋白、自噬相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平,分析JNK/c-Jun通路对细胞自噬和凋亡的影响。结果:与对照组相比,Cd Cl2染毒组细胞内自噬体聚集且凋亡细胞增多,LC3II/LC3I、P62、Beclin-1、Atg5、Atg7、Atg13、Bax、Caspase-9及Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加,而Bcl-2表达显著降低（P＜0.05）。与Cd Cl2处理组相比,3-MA抑制LC3II/LC3I、P62、Beclin-1、Atg5、Atg7、Atg13表达,差异有统计学意义（P＜0.05）,而z VAD-fmk对上述蛋白的表达无显著影响（P＞0.05）。此外,3-MA和z VAD-fmk均能抑制Bax、Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白表达,增强Bcl-2蛋白表达（P＜0.05）。免疫荧光结果显示,经Cd Cl2和CQ处理后,细胞内溶酶体和LC3共定位荧光信号减弱;Western blot结果显示,与CQ处理组比较,Cd Cl2+CQ处理组LC3II/LC3I、P62和Cleaved Caspase-3的表达明显增加（P＜0.05）。与Cd Cl2处理组相比,SP600125抑制p-JNK、p-c-Jun、LC3II/LC3I、P62、Beclin-1、Atg5、Atg7、Atg13、Bax、Caspase-9和Cleaved Caspase-3表达,促进Bcl-2表达,差异有统计学意义（P＜0.05）,而对c-Jun的表达无显著影响（P＞0.05）。结论:氯化镉可能通过抑制自噬体与溶酶体融合从而引起自噬流阻滞,促使自噬体异常聚集,诱导GC-2 spd细胞凋亡。
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