胆固醇氧化酶（EC1.1.3.6，ChOx）能将胆固醇转化成胆甾-4-烯-3-酮和过氧化氢，除了在疾病诊断领域应用普遍外，胆固醇氧化酶在降解食品胆固醇方面日益凸显出巨大潜力。目前，野生型胆固醇氧化酶产生菌的产酶水平较低（300U/L），故本论文首先从筛选高产菌株出发，利用高效的筛选组合策略筛选得到一株产酶量达880U/L的菌株，经鉴定为马红球菌(Rhodococcus equi)，并命名为Rhodococcus equi WGC1。为了克服野生型酶固有问题，即产酶水平不固定、分离纯化繁琐、性质不易改造等，借鉴酶制剂发展趋势，以Rhodococcus equi WGC1基因组DNA为模板，成功克隆出胆固醇氧化酶基因（ChoE）。并针对胆固醇氧化酶基因所编码的蛋白，从一级、二级、三级结构方面进行了较为详细地分析和预测。随后，将ChoE与实验室前期构建好的双标签L2(252-273)-SUMO融合并转入大肠杆菌中，经25°C乳糖诱导表达后发现，90%以上的融合蛋白具有活性并存在于细胞破碎上清中。最后，研究集中于重组胆固醇氧化酶的纯化，以廉价的硅藻土作为吸附介质，pH5.0的吸附条件下，在30min时基本达到吸附平衡，饱和吸附容量约为6.8mg蛋白/g硅藻土。加入SUMO酶后，只有重组胆固醇氧化酶被切下并存在于上清中，最终回收率87.3%，纯化倍数13.4，相较于其它纯化方法，本方法精简了步骤，避免了高盐洗脱，同时获得了具有天然N端的重组胆固醇氧化酶。可见，双标签L2(252-273)-SUMO介导的纯化策略能达到较好的一步纯化效果。其次，对重组胆固醇氧化酶的主要酶学性质（pH、温度）进行了研究，结果显示，该重组酶的最适pH为7.5，最适温度为50°C，保温2h时酶的半衰期温度在55°C左右。