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背景：CD147,一种属于免疫球蛋白超家族成员的跨膜糖蛋白,近年来被证实在耐药的乳腺肿瘤细胞中增高表达,通过对耐药相关蛋白(如CD44, MCTs, ATP家族成员)的调控而参与介导肿瘤多药耐药(MDR)。ABCG2,又名BCRP,是目前为众人所知的乳腺癌耐药相关蛋白,最先从乳腺癌耐药细胞株MCF-7/AdrVp克隆出来,通过介导多种化疗药物细胞外流导致肿瘤细胞对药物产生抵抗。目前有文献发现CD147、ABCG2在白血病细胞膜上形成复合物,共同介导了肿瘤耐药的发生。对于二者是否相互调控及其在乳腺癌耐药中的作用仍不明确。本研究旨在明确CD147是否调控了ABCG2的表达和功能及其调控机制和对乳腺癌化疗耐药的影响,为逆转乳腺癌化疗耐药提供新的靶分子。研究目的：1.探讨CD147是否调控ABCG2的表达和功能。2.探讨CD147调控ABCG2功能的内在机制。3.探讨CD147调控ABCG2对乳腺癌化疗耐药的影响。研究方法：1.构建稳定转染CD147和/或ABCG2的细胞MCF-7/Control, MCF-7/CD147, MCF-7/ABCG2, MCF-7/CD147+ABCG2(简称为MCF-7/Con, MCF-7/C, MCF-7/B, MCF-7/C+B)。2. Western Blot和RT-PCR检测四株细胞中CD147和ABCG2的表达,并分析四种细胞株中ABCG2的表达差异和CD147的相关性。3.运用MTT法检测四种细胞株对临床化疗药物表柔比星(ABCG2底物)和5-氟尿嘧啶(非ABCG2底物)的敏感性。4.选取合适浓度的米托蒽醌诱导MCF-7/Con和MCF-7/C细胞ABCG2的表达,并分析不同作用时间点下两种细胞ABCG2蛋白和mRNA表达的差异。5. Western Blot检测四株细胞中ABCG2同源二聚体的表达,并分析CD147对其表达的影响。6.免疫荧光观察二者在四株细胞中的定位及共存情况,并分析CD147对ABCG2定位的影响。7.免疫共沉淀检测CD147与ABCG2在MCF-7/C+B细胞中是否形成复合物。8.免疫组织化学检测临床乳腺浸润性导管癌化疗耐药／敏感组以及正常乳腺组织中CD147和ABCG2的表达情况,并分析两者表达的相关性及其与耐药的关系。研究结果：1.成功建立高表达CD147和／或ABCG2的细胞株MCF-7/Con, MCF-7/C, MCF-7/B, MCF-7/C+B用于开展后续的研究工作。2.与MCF-7/B比较,MCF-7/C+B细胞中的ABCG2蛋白表达显著性增高(P<0.05),而其mRNA水平无显著性差异。3.MCF-7/C+B与MCF-7/B,MCF-7/C与MCF-7/Con之间对表柔比星的敏感性存在统计学差异(P均<0.05),IC50分别为17.09±1.7uM,10.13±0.55uM和2.76±0.07uM,0.98±0.06uM。而MCF-7/C+B与MCF-7/C,MCF-7/B与MCF-7/Con之间对于5-氟尿嘧啶的敏感性无显著性差异(P均>0.05),IC50分别为1339.33±37.68uM,1275.4±19.89uM和478.94±42.13uM,413.95±17.55uM。这提示CD147通过影响ABCG2的功能进而介导了乳腺癌细胞对表柔比星的耐药。4.在米托蒽醌诱导下,MCF-7/Con和MCF-7/C细胞中的ABCG2蛋白和mRNA表达上调具有时间依赖性,并且两种细胞中的ABCG2蛋白在各个时间点均有显著性差异(P<0.05)但其mRNA无显著性差异。提示CD147可调控ABCG2的蛋白表达。5.相较于MCF-7/B细胞,MCF-7/C+B细胞中的ABCG2同源二聚体表达显著性升高(P<0.001),提示CD147可影响ABCG2的同源二聚体形成。6.与MCF-7/B相比较,MCF-7/C+B中ABCG2更多聚集在膜上,CD147与ABCG2在膜上共存。7.免疫共沉淀显示CD147与ABCG2在MCF-7/C+B细胞中以复合物形式存在。8.乳腺浸润性导管癌化疗抵抗组CD147及ABCG2表达明显强于化疗敏感组,部分组织细胞出现了ABCG2勺胞膜聚集现象。CD147与ABCG2表达存在相关性(P<0.05)。结论1.在乳腺癌细胞中,CD147调控ABCG2的蛋白表达和功能,可能通过影响其细胞内定位和二聚体的形成来影响ABCG2的转运功能。2.CD147与ABCG2在乳腺浸润性导管癌中的表达存在正相关,两者共同参与调控乳腺癌的化疗耐药。